磺胺类药物和复方新诺明对兽医病原体的最低抑菌浓度：这些老抗生素的新数据

《Veterinary Microbiology》：Minimum inhibitory concentrations of sulfonamides and trimethoprim for veterinary pathogens: new data for old antibiotics

本研究针对猪蓝细菌病、大肠杆菌等七种兽医病原体，通过 broth microdilution 法测定其磺胺类药物及复方 Trimethoprim-Sulfamethoxazole（1:19）的MIC分布，评估现有ECOFF和QC范围，并提出新的ECOFF建议（如A. pleuropneumoniae 0.12 mg/L，S. equi subspecies zooepidemicus 8 mg/L），为制定临床 breakpoints提供依据。

　　本研究聚焦于兽用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）分布及其在抗菌药物敏感性测试（AST）中的应用价值。随着全球对抗微生物耐药性（AMR）问题的关注度不断提高，如何科学合理地使用抗生素成为兽医学领域的重要议题。为了更好地支持这一目标，研究团队旨在通过分析几种关键兽用病原体对多种磺胺类药物和甲氧苄啶（trimethoprim）的MIC数据，为缺乏明确解释标准的药物建立初步的流行病学截断值（ECOFFs），并进一步提出可能的抗菌药物临床断点（CBPs）。

### 抗菌药物使用现状与挑战

在兽医学中，抗菌药物的使用不仅关系到动物健康，还对人类公共卫生构成潜在威胁。为了优化抗菌药物的使用，世界卫生组织（WHO）在2015年提出的全球行动计划中，将“优化抗菌药物的使用”列为五大战略目标之一。随后，WHO、世界动物卫生组织（WOAH）、联合国粮食及农业组织（FAO）以及欧盟（EU）相继发布了相关标准、指南和法规，以减少抗菌药物耐药性的进一步发展。这些措施推动了对第一线抗菌药物，尤其是磺胺类药物和甲氧苄啶的使用需求。然而，尽管这些药物在临床中广泛使用，目前在兽医学领域中，关于其MIC数据和解释标准的信息仍然不足，特别是对于某些磺胺类药物如磺胺嘧啶（sulfadiazine）和磺胺甲氧苄啶（sulfadimethoxine），尚未建立明确的临床断点。

为了应对这一挑战，本研究对多种重要的兽用病原体进行了MIC测试，包括猪肺炎放线杆菌（*Actinobacillus pleuropneumoniae*）、大肠杆菌（*Escherichia coli*）、溶血性曼氏汉赛杆菌（*Mannheimia haemolytica*）、多杀巴斯德菌（*Pasteurella multocida*）、犬葡萄球菌（*Staphylococcus pseudintermedius*）、马传染性脓疱疮菌（*Streptococcus equi* subsp. *equi*）和马源性脓疱疮菌（*Streptococcus equi* subsp. *zooepidemicus*），分别使用了甲氧苄啶-磺胺甲氧苄啶（1:19）组合、磺胺甲氧苄啶、磺胺嘧啶、磺胺甲氧苄啶和甲氧苄啶单药。通过这些数据，研究团队希望为这些药物提供更加准确的解释标准，从而促进其在兽医学中的合理使用。

### MIC测定方法与标准

MIC的测定采用的是欧洲抗菌药物敏感性测试委员会（EUCAST）推荐的肉汤微稀释法。该方法通过一系列浓度梯度的抗菌药物测试，确定抑制细菌生长的最低浓度。为了确保数据的准确性和可比性，研究团队使用了定制的冻干药敏板，这些药敏板涵盖了广泛的浓度范围，以满足不同病原体的测试需求。所有病原体样本在实验前经过适当的复苏和培养，确保其处于最佳生长状态。培养条件严格按照EUCAST的标准执行，包括使用特定的培养基、控制温湿度和培养时间等。

对于非苛求营养的细菌，使用了调整阳离子的Mueller-Hinton肉汤（CAMHB）作为培养基，而对于苛求营养的细菌，则使用了补充了5%溶血马血和20 mg/L β-NAD的Mueller-Hinton苛求营养肉汤（MH-F broth）。所有测试均在自动化系统下进行，以提高操作的标准化程度和结果的可重复性。通过这种方式，研究团队确保了实验结果的可靠性，并为后续的分析奠定了基础。

### MIC分布与ECOFFs的设定

研究团队首先对不同病原体的MIC分布进行了初步分析，以判断其是否符合EUCAST设定ECOFFs的标准。对于甲氧苄啶-磺胺甲氧苄啶（1:19）组合，大部分病原体的MIC分布均符合EUCAST的标准，因此可以提出初步的ECOFFs。然而，对于磺胺嘧啶和磺胺甲氧苄啶，由于测试浓度范围（>256 mg/L）较低，无法生成足够的数据来支持ECOFFs的设定。这表明，对于某些药物，需要更宽的浓度范围才能准确评估其MIC分布，进而设定合适的解释标准。

在具体的病原体分析中，研究团队发现，猪肺炎放线杆菌的MIC分布主要集中在较低浓度，且符合ECOFFs标准，因此可以将其归类为野生型菌株。大肠杆菌的MIC分布也较为集中，且大部分样本符合野生型菌株的标准。然而，犬葡萄球菌的MIC分布呈现出双峰特征，表明可能存在不同的菌株群体，其中一部分具有较高的MIC值，可能与耐药性相关。对于马传染性脓疱疮菌的两个亚种，研究团队发现它们的MIC分布范围较广，且在测试浓度范围内未出现截断现象，这为设定ECOFFs提供了重要依据。

此外，研究团队还对几种已知的质控菌株进行了MIC测试，以评估其在设定ECOFFs中的适用性。这些质控菌株包括大肠杆菌ATCC? 25922、金黄色葡萄球菌ATCC? 23213以及一些苛求营养的菌株，如肺炎链球菌ATCC? 49619、溶血性曼氏汉赛杆菌ATCC? 33396和猪肺炎放线杆菌ATCC? 27090。这些质控菌株的MIC值在测试范围内保持稳定，且符合EUCAST的质控标准，表明它们可以作为设定ECOFFs的参考。

### 抗菌药物耐药性分析

研究团队进一步分析了不同病原体对磺胺类药物和甲氧苄啶的耐药情况。结果显示，对于甲氧苄啶-磺胺甲氧苄啶（1:19）组合，大部分病原体的MIC值均处于野生型范围内，表明其对这些药物的敏感性较高。然而，某些菌株的MIC值较高，可能与耐药机制有关。例如，犬葡萄球菌和马传染性脓疱疮菌的某些菌株在测试浓度范围内表现出较高的MIC值，这可能意味着它们对这些药物的敏感性较低，或者已经发生了耐药性。

对于磺胺类药物，如磺胺甲氧苄啶、磺胺嘧啶和磺胺甲氧苄啶，研究团队发现其MIC分布较为分散，尤其是在某些病原体中，如马传染性脓疱疮菌的两个亚种，其MIC值的分布范围非常广泛，甚至部分菌株的MIC值超过了测试的最高浓度。这表明，对于这些药物，需要更宽的浓度范围才能准确评估其MIC分布，并设定合理的解释标准。此外，磺胺类药物的MIC测定过程中存在一定的挑战，尤其是由于抗菌药物的尾部抑制效应，导致MIC值的判定较为困难，从而影响了结果的准确性。

### 研究意义与未来方向

本研究的结果对于优化抗菌药物的使用具有重要意义。通过建立这些药物的MIC分布数据，可以为兽医在临床实践中提供更准确的药物选择依据，从而减少不必要的药物使用，延缓耐药性的产生。同时，研究团队提出了一些初步的ECOFFs，为后续的多实验室协作研究提供了基础。这些数据不仅有助于设定更合理的解释标准，还可以为临床断点的制定提供参考。

此外，研究团队还指出，目前对于某些磺胺类药物，如磺胺嘧啶和磺胺甲氧苄啶，尚未建立明确的临床断点。这可能是因为这些药物在兽医学中的使用频率较低，或者缺乏足够的耐药性数据。因此，未来的研究需要进一步收集更多数据，以验证这些药物的MIC分布和耐药性特征，并最终设定临床断点。

### 结论

本研究通过对多种重要兽用病原体的MIC测定，提供了关于磺胺类药物和甲氧苄啶的耐药性数据。这些数据不仅有助于理解当前抗菌药物的使用情况，还为未来设定合理的解释标准和临床断点提供了基础。研究团队强调，为了更好地支持抗菌药物的合理使用，需要进一步开展多实验室协作研究，以生成符合EUCAST标准的MIC数据，并最终确定缺失的ECOFFs和CBPs。通过这些努力，可以促进抗菌药物的科学使用，减少耐药性的传播，并保障动物和人类的健康。