《Fish & Shellfish Immunology》：Use of Shotgun Immunoproteomics for the Development of Protein Vaccines against
Edwardsiella piscicida
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本研究通过免疫蛋白质组学筛选出36种候选免疫蛋白，评估其作为蛋白疫苗在鱼类中的应用。发现口服或腹腔注射GroEL蛋白对鲑鱼具有反保护作用，而GlyZip和COPIII疫苗虽未显著提高存活率，但诱导了强烈的特异性抗体应答，验证了 shotggun immunoproteomics 在检测宿主免疫反应相关蛋白的有效性。
金·L·雅各布森（Kim L. Jacobsen）| 马特·格里芬（Matt Griffin）| 布雷特·S·芬尼（Brett S. Phinney）| 米歇尔·萨莱米（Michelle Salemi）| 泽伊娜布·亚兹迪（Zeinab Yazdi）| 苏吉塔·巴拉米（Sujita Balami）| 凯特琳·E·奥尔德（Caitlin E. Older）| 辛西娅·C·韦尔（Cynthia C. Ware）| 费尔南多·Y·山本（Fernando Y. Yamamoto）| 努尔-乌尔-胡达（Noor-ul-Huda）| 塔尼娅·罗德里格斯-拉莫斯（Tania Rodriguez-Ramos）| 布赖恩·迪克森（Brian Dixon）| 马杰（Jie Ma）| 本杰明·R·拉弗伦茨（Benjamin R. LaFrentz）| 埃斯特班·索托（Esteban Soto）
加利福尼亚大学戴维斯分校兽医学院医学与流行病学系，邮编95616
摘要
Edwardsiella piscicida 是多种养殖鱼类中一种重要的新兴病原体。本研究旨在鉴定具有免疫原性的 E. piscicida 蛋白质，并评估这些抗原作为水产养殖用蛋白质疫苗的潜力。通过使用来自虹鳟（Oncorhynchus mykiss）和通道鲶鱼（Ictalurus punctatus）× 蓝鲶鱼（Ictalurus furcatus）杂交鱼的抗 E. piscicida 血清，对经甲醛灭活的完整细菌制剂进行鸟枪法免疫蛋白质组学分析，共鉴定出36种具有免疫原性的 E. piscicida 蛋白质。Chaparonin GroEL、含有甘氨酸2TM拉链结构域的蛋白质（GlyZip）和粪卟啉原-III氧化酶（COPIII）被用于通过口服（PO）和腹腔内注射（IC）的方式对奇努克鲑鱼（Oncorhynchus tshawytscha）进行免疫。接受GlyZip或COPIII免疫的鱼类在接触 E. piscicida S11-285 后存活率略有提升，但差异不显著。令人惊讶的是，接受GroEL免疫的鱼类表现出抗保护作用（RPS分别为-184%和-76%）。所有接受腹腔内免疫的鱼类均产生了针对免疫蛋白的强烈特异性抗体反应，而未接受免疫的对照组鱼类在接触 E. piscicida S11-285 后产生的特异性抗体反应显著高于对照组，这表明鸟枪法免疫蛋白质组学在检测能够刺激宿主鱼类体液免疫反应的免疫原性细菌蛋白方面是有效的。
部分内容摘录
引言
传染病是全球水产养殖面临的最重要威胁之一，会降低养殖动物的生长速度，并因疾病和死亡造成巨大的经济损失。Edwardsiella 属细菌引起的疾病每年给美国水产养殖业造成的经济损失估计超过5000万美元[1]。该属细菌包含五个不同的物种，其中四种已知会感染鱼类并引发疾病。Edwardsiella ictaluri 是...
实验动物
虹鳟（Oncorhynchus mykiss），体重约30-50克，从美国加利福尼亚州锡斯基尤县（Siskiyou County）的Mount Shasta鱼苗场获取，随机分配到实验组和对照组（每组12条鱼），并在加利福尼亚州戴维斯市（Davis, CA）的水生生物学和水产养殖中心（Center for Aquatic Biology and Aquaculture）的35升水箱中饲养（温度18±1°C；氨含量0 ppm；亚硝酸盐含量0 ppm；硝酸盐含量40 ppm；pH值8.0），通过流水系统以每分钟4升的流速供水，并配备补充曝气。通道鲶鱼和杂交鲶鱼对E. piscid S11-285的免疫反应更强
用甲醛灭活的 E. piscid 加 Montanide? ISA 763 A制剂进行的免疫接种在虹鳟、通道鲶鱼和杂交鲶鱼中引发了显著的体液免疫反应（图2）。与阴性对照组相比，几乎所有疫苗组的虹鳟、通道鲶鱼和杂交鲶鱼血清中的 E. piscid S11-285 IgM水平显著升高（p < 0.05）。所有接受免疫的虹鳟对 E. piscid 的IgM反应均显著增强。讨论
本研究中，来自六个细菌分支的代表性菌株的甲醛灭活 E. piscid 制剂在虹鳟、通道鲶鱼和杂交鲶鱼中引发了针对 E. piscid S11-285 的显著特异性抗体反应。这一发现表明，这些遗传上不同的菌株具有能够引发跨分支交叉反应的抗体的共同抗原。观察到的抗体反应的交叉反应性强调了...
作者贡献
金·雅各布森（Kim Jacobsen）：概念构思、方法设计、数据分析、研究实施、写作——初稿撰写、数据可视化；马特·格里芬（Matt Griffin）：概念构思、研究实施、写作——审稿与编辑、监督、资金获取；布雷特·S·芬尼（Brett S. Phinney）：数据分析、监督、资源提供；米歇尔·萨莱米（Michelle Salami）：数据分析、资源提供、写作——审稿与编辑；泽伊娜布·亚兹迪（Zeinab Yazdi）：研究实施；苏吉塔·巴拉米（Sujita Balami）：研究实施；凯特琳·E·奥尔德（Caitlin E. Older）：数据管理、研究实施、写作——审稿与...
伦理批准声明
所有鳟鱼和鲑鱼的实验均获得了加利福尼亚大学戴维斯分校机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准，符合《动物福利法》以及所有其他关于动物护理和实验的州和联邦法规。所有鲶鱼实验均符合密西西比州立大学IACUC以及所有其他关于动物护理和实验的州和联邦法规。资金声明
本项工作得到了食品与农业研究基金会（FFAR）和T32比较医学科学家培训计划（授权号OD 011147）的资助。Thermo Fisher LC/MS系统的使用得到了NIH授权号1S10OD026918-01A1的支持。致谢
我们感谢食品与农业研究基金会和T32比较医学科学家培训计划（授权号OD 011147）对本项目的慷慨资助。同时感谢Seppic USA和Marie-Eve Koziol捐赠的Montanide? TSA 763 A佐剂和Montanide? GR-01佐剂。本文中提及的商标名或商业产品仅用于提供具体信息，并不表示任何推荐或...
