《Clinical Science》：The role of relaxins in blood cell modulation: interactions with relaxin family peptide receptor 1 (RXFP1) and glucocorticoid receptor (GR)
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松弛素家族（relaxin family）作为多效性激素，具有抗氧化（antioxidant）、促血管生成（angiogenic）、抗凋亡（anti-apoptotic）、抗肥大（anti-hypertrophic）、抗炎（anti-inflammatory）
松弛素家族（relaxin family）作为多效性激素，具有抗氧化（antioxidant）、促血管生成（angiogenic）、抗凋亡（anti-apoptotic）、抗肥大（anti-hypertrophic）、抗炎（anti-inflammatory）、抗纤维化（antifibrotic）和血管舒张（vasodilatory）等多种作用。为了充分认识松弛素（relaxins）的潜在治疗应用及其病理生理学意义，了解其多方面的作用至关重要。研究人员通过本综述旨在阐明松弛素在调节血细胞（blood cells）生物学和功能中的作用，特别强调由松弛素-2（relaxin-2）激活的松弛素家族肽受体1（RXFP1）和糖皮质激素受体（GR）的信号通路。松弛素-2影响循环血细胞计数，并对巨核细胞（megakaryocytes）、血小板（thrombocytes）和肥大细胞（mast cells）发挥抑制作用。它还具备免疫调节特性，影响粒细胞（granulocytes）和粒细胞缺乏细胞（agranulocytes），尤其是在其形态、分化和功能方面。松弛素-1（relaxin-1）调节树突状细胞（dendritic cells）的成熟和细胞因子分泌。RXFP1可能在血液恶性肿瘤和子痫前期（preeclampsia）中发挥重要作用。松弛素所展现的广泛活性显著影响血细胞生物学，并突显其在多种疾病（包括血液、心血管、肾脏、妊娠相关和纤维化疾病）中的治疗潜力。
**引言**
松弛素-2（relaxin-2）是胰岛素超家族（insulin superfamily）的成员，最初被描述为参与妊娠期间耻骨间韧带松弛的肽类激素，但其生物学作用现已扩展至结缔组织重塑、妊娠和女性生理学之外。在非妊娠期，系统性松弛素-2水平极低或缺失，但局部组织可分泌该激素，发挥多效性作用，包括对血细胞群体的影响。研究表明，松弛素-2可暂时影响循环血细胞成分的数量，如升高白细胞计数、降低淋巴细胞和增加中性粒细胞数量，并减少红细胞计数。此外，松弛素-2调节免疫细胞功能、血小板聚集以及中性粒细胞、肥大细胞和T细胞活性，并影响免疫细胞募集和极化，在炎症和血液病中具有潜在意义。
**松弛素：多功能肽类激素及其受体**
松弛素肽家族包含7个成员，由RLN1-3基因编码的松弛素亚型和INSL3-6基因编码的胰岛素样肽组成。成熟松弛素为双链肽，分子量约6 kDa，含有一个链内和两个链间二硫键。松弛素-2主要通过G蛋白偶联受体RXFP1（原LGR7）发挥作用，而RXFP2（原LGR8）也可被激活，但松弛素-2在体内对RXFP2的生理激活尚无证据。此外，松弛素-2被鉴定为糖皮质激素受体（GR）激动剂，而皮质醇是主要的生理性GR配体，调节免疫活性。这一发现为松弛素-2的免疫调节作用提供了新视角。
**RXFP1：介导松弛素信号传导的主要受体**
RXFP1是一种A类G蛋白偶联受体，具有独特的胞外结构：N端低密度脂蛋白A类模块（LDLa）连接至富含亮氨酸重复序列（LRR）结构域，两者对配体识别和受体激活至关重要。松弛素-2与LRR结构域结合后，促进LDLa模块与跨膜束的分子内相互作用，稳定活性GPCR构象，从而偶联多种G蛋白。经典RXFP1激活刺激Gs增加cAMP/PKA信号，但也可参与Gi/o、PI3K/Akt、ERK1/2、PKC-ζ和NO-sGC-cGMP通路，信号输出取决于细胞类型。在血管内皮细胞中，RXFP1通过PI3K-Akt激活eNOS，增加NO和cGMP，驱动血管舒张和抗炎作用；在间充质细胞中，RXFP1激活ERK1/2和nNOS来源的NO，上调胶原降解MMPs，中断TGF-β/Smad2信号，逆转肌成纤维细胞分化；在肝星状细胞中，RXFP1抑制TGF-β/Smad活性，增强胶原酶表达，并可能涉及PPARγ；在纤维软骨细胞中，RXFP1驱动ERK/PI3K通路诱导MMP-9/13，重塑细胞外基质；在生殖组织中，RXFP1升高cAMP和ERK活性，并与类固醇通路交互；在神经细胞中，RXFP1激活ERK-nNOS-NO信号，提供抗氧化和抗凋亡保护。此外，RXFP1在白血病细胞中表达显著升高，急性髓系白血病（AML）中增加2.71倍，慢性髓系白血病（CML）中增加3.31倍，且高表达与较差癌症特异性生存率相关，提示其在白血病进展和治疗中的潜在作用。
**GR作为松弛素作用的替代介质**
松弛素-2作为GR激动剂的发现源于RU486（GR拮抗剂）可消除其免疫抑制效应。研究表明，松弛素-2激活GR，诱导糖皮质激素响应元件（GRE）控制下的基因表达，抑制促炎细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）分泌，且效力强于地塞米松（DEX）。松弛素-2与GR复合物结合，促进GR核转位，并在30分钟内达到峰值。直接结合实验中，松弛素-2与GR具有高亲和力（IC50~0.4-4 nM），优于DEX和皮质酮，并诱导GR丝氨酸211磷酸化。功能上，松弛素-2模拟DEX上调抗氧化酶，抑制NF-κB和AP-1转录活性，这些效应被RU486或GR基因沉默消除。在体内，松弛素-2改善TNFα诱导的内皮功能障碍和急性胰腺炎，减少促炎细胞因子，RU486可逆转这些效应。重要的是，化学修饰阻止RXFP1相互作用的松弛素-2仍保留GR结合能力，提示GR激活可独立于经典松弛素受体。然而，在HEK293T细胞（缺乏RXFP1/2）中，松弛素-2未激活GRE，而在RXFP1转染的HEK293T细胞中触发GRE响应，表明细胞类型或受体背景依赖性。不同研究结果存在矛盾，可能与实验设计差异有关，包括细胞类型、报告系统和松弛素-2浓度。Horton等提出，较低浓度优先激活GR，较高浓度激活RXFP1，为差异提供解释。总体而言，证据支持松弛素-2作为功能性GR激动剂，但RXFP1的贡献和浓度依赖性尚需进一步研究。
**松弛素及其对血细胞功能的影响**
血细胞来源于造血干细胞（HSC），分为髓系和淋巴系。松弛素-2对多种血细胞类型产生影响，以下分述。
**松弛素-2对巨核细胞和血小板的影响**
松弛素-2剂量依赖性地减少血小板数量并抑制聚集，伴随巨核细胞形态改变，包括细胞骨架重排限制血小板释放。信号层面，松弛素-2通过L-精氨酸-NO-cGMP途径抑制血小板活化的构象变化和颗粒胞吐。血小板表达RXFP1作为唯一经典松弛素受体，表明松弛素-2直接调节血小板功能。GR的作用尚不明确，巨核细胞中GR增强血小板释放但抑制聚集，但血小板无核，无法进行经典基因组GR信号，需进一步研究。松弛素-2作为血小板产生和活化的负调节因子，主要经RXFP1和NO-cGMP信号，可能具有抗血栓和免疫调节潜力。
**松弛素-2对肥大细胞的影响**
松弛素-2减少肥大细胞脱颗粒，降低循环组胺水平。通过肥大细胞表达的RXFP1激活，松弛素-2抑制糜酶、类胰蛋白酶、IL-6和TNF-α释放，涉及增加NO产生、降低胞内Ca2?浓度和升高cGMP，抑制钙依赖性胞吐。松弛素-2还通过PI3K-Akt通路抑制NF-κB，增强抗炎作用。GR也可能参与，糖皮质激素稳定肥大细胞并限制组胺释放，可能通过快速非基因组GR通路，但直接机制研究尚缺。
**松弛素-2对白细胞的影响**
白细胞包括粒细胞和粒细胞缺乏细胞。GR在所有白细胞群体中表达，RXFP1在淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞及某些祖细胞和血液肿瘤细胞系中表达。松弛素-2影响白细胞数量，如增加子宫内膜中中性粒细胞、CD56+ NK细胞和CD68+巨噬细胞，而不影响CD3+ T淋巴细胞。在心脏缺血-再灌注模型中，松弛素-2减少白细胞密度，抑制IL-1β、IL-6和MCP-1表达，不影响TNFα。此外，松弛素-2可通过刺激糖蛋白（glycodelin）合成间接调节免疫，糖蛋白启动子含有GRE/PRE，可能通过GR激活；同时，松弛素-2可能通过半乳凝素（galectins）调节免疫，但机制尚不明确。
**松弛素-2对粒细胞的影响**
- **中性粒细胞**：松弛素-2剂量依赖性地降低CD11b表达和超氧阴离子产生，增强NO合成，降低胞内Ca2?水平，抑制脱颗粒、趋化和氧化爆发，这些效应依赖RXFP1和NO-cGMP信号。松弛素-2还通过降低P-selectin和VCAM-1表达，减少中性粒细胞滚动、黏附和跨内皮迁移。在心肌缺血-再灌注模型中，松弛素-2降低中性粒细胞浸润、MPO活性和脂质过氧化产物，维持钙稳态。GR也可能参与，但松弛素-2对NO信号的依赖性提示RXFP1主导。
- **嗜碱性粒细胞**：松弛素-2剂量依赖性地降低CD63表达，防止免疫原性和非免疫原性刺激下的过敏性脱颗粒，通过增强钙/钙调蛋白依赖性NO合酶活性增加内源性NO产生，NOS抑制剂可逆转其效应。GR也可能通过非基因组通路抑制嗜碱性粒细胞活化，但松弛素-2主要经RXFP1发挥作用。
- **嗜酸性粒细胞**：松弛素-2对嗜酸性粒细胞的影响研究有限，一项研究未观察到其形态或功能显著变化，但可能通过调节Th2细胞因子和IL-13发挥抗纤维化作用，需进一步研究。
**松弛素-2对粒细胞缺乏细胞的影响**
松弛素-2影响外周血单核细胞（PBMC），增加TNF-α和IL-1β分泌，并诱导cAMP积累，促进黏附和迁移。在CD4+ T细胞中，松弛素-2促进向Th1分化，增强IFN-γ产生，而不影响IL-4，提示对Th1的直接作用，与GR偏向Th2的方向不同。在系统性红斑狼疮（SLE）中，松弛素-2对T细胞和单核细胞有调节作用，但不影响B淋巴细胞或抗dsDNA抗体水平。
**单核吞噬细胞系统（MPS）细胞中松弛素家族肽受体的表达**
在不同细胞类型和分化状态下，RXFP1表达各异。THP-1单核/巨噬细胞系中RXFP1高表达，RXFP3和RXFP4低表达；分化后的THP-1细胞RXFP1表达最低；肿瘤微环境中的巨噬细胞RXFP1水平最高。人蜕膜巨噬细胞（DMs）表达RXFP1，但水平低于THP-1细胞。
**松弛素-1和松弛素-2对免疫细胞浸润的差异效应**
松弛素-2一致地限制巨噬细胞浸润，减少心肌和肝脏移植模型中的巨噬细胞和中性粒细胞进入，与糖皮质激素类似。松弛素-1则促进细胞毒性T细胞、树突状细胞和NK细胞浸润，减少Treg，将肿瘤微环境转向抗肿瘤表型。
**松弛素-2作为肿瘤微环境动力学的调节剂**
松弛素-2促进单核细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），通过RXFP1激活增强TAM浸润，依赖cAMP和NO信号，有利于肿瘤生长和转移。这与非恶性环境中的抗炎作用形成对比。
**松弛素-2介导的黏附、迁移和细胞因子产生**
松弛素-2增强THP-1细胞黏附（1.5倍）和迁移（近2倍）至MCP-1，依赖RXFP1/Gαs/腺苷酸环化酶/cAMP轴，并引起双相cAMP响应和短暂MAPK激活。在细胞因子方面，松弛素-2降低THP-1细胞中IL-6和IL-1β mRNA，不影响TNF-α和IL-10；在蜕膜巨噬细胞中减少CSF2和IL-8分泌；在LPS刺激的巨噬细胞中抑制IL-1、IL-6、TNF-α达40%。松弛素-2还诱导VEGF和bFGF表达，支持血管生成，并上调MMP-9（通过NF-κB），不同于糖皮质激素。这些效应中，部分与GR依赖的免疫调节重叠，但松弛素-2增强VEGF和MMP-9，表明其作用超出经典GR生物学。
**松弛素在巨噬细胞极化中的作用**
松弛素-2促进巨噬细胞向M2样抗炎表型极化，增加MRC、IL-4、精氨酸酶、IL-10、Ym1和CX3CR1表达，减少iNOS、TNF-α、CCL-3和IL-23。体外和体内实验均证实松弛素-2诱导M0和M1向M2转化，机制涉及抑制TLR4-MyD88-NF-κB信号。GR同样促进M2极化，抑制CCL3并增强MRC1表达。分化THP-1细胞中GR水平高而RXFP1低，提示松弛素-2可能通过GR作用；在蜕膜巨噬细胞中，RU486逆转松弛素-2效应，支持GR激动剂角色。此外，松弛素-2激活CREB，可能增强GR信号，并抑制AP-1激活。
**松弛素-1对抗原呈递细胞的影响**
松弛素-1诱导未成熟树突状细胞（DC）成熟，增加CD80、CD86和MHC I/II类分子表达，促进促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）分泌，增强抗原呈递和T细胞激活，可能通过DC表达的RXFP1介导。
**总结与未来展望**
松弛素-2对多种血细胞类型具有抑制作用（巨核细胞、血小板、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞），同时刺激糖蛋白合成和Th1分化，调节巨噬细胞浸润和极化，抑制促炎细胞因子。松弛素-1则增强免疫活性，如诱导DC成熟。RXFP1在白血病和子痫前期中具有临床意义。松弛素-2的双受体机制（RXFP1和GR）解释了其部分重叠但非完全相同的效应，如增强VEGF和MMP-9不同于糖皮质激素。未来研究需明确RXFP1和GR的独立贡献，并探索松弛素-2在自身免疫病、纤维化疾病和妊娠并发症中的治疗潜力，同时关注免疫原性和抗血栓活性等安全性问题。
