通过绿色指标和“质量源于设计”（Quality by Design）工具评估了用于制剂样品中Sparsentan成分测定的UPLC方法

《Green Analytical Chemistry》：Green metrics and Quality by Design tool evaluated UPLC content determination method for Sparsentan in formulation sample

高效液相色谱法（UPLC）测定Sparsentan的建立与验证，符合ICH指南，显示高灵敏（检测限0.16 ppm）、线性（R2=0.9995）及精密度（RSD 0.3%-0.4%），稳定性研究证实酸/氧化/光降解敏感，热/碱/中性稳定，并通过QbD及绿色化学工具（GAPI/NEMI/Eco-scale/AGREE）验证环保性。

　　本研究探讨了一种用于测定药物成分Sparsentan（SRN）在药品制剂中的分析方法。Sparsentan是一种新型的双受体拮抗剂，能够同时阻断内皮素A受体（ETAR）和血管紧张素II受体（AT1R），用于减少成人原发性免疫球蛋白A肾病（IgA肾病）患者的蛋白尿，以延缓疾病进展。由于其在药理学和药代动力学方面的独特特性，Sparsentan在临床上具有重要价值。然而，为了确保其在制药领域的质量和稳定性，建立一种可靠、高效、环保的分析方法至关重要。

### 方法的开发与验证

本研究采用反相高效液相色谱（UPLC）技术，通过优化实验条件，开发了一种稳定性指示方法。该方法使用了ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（1.7 μm，2.1 mm × 150 mm），并采用0.1%三氟乙酸（pH 4.0）与甲醇（65:35 v/v）作为流动相。色谱柱温度保持在42°C，样品室温度为5°C，流速设定为0.3 mL/min，检测波长为263 nm，总运行时间仅为3.0分钟。这些参数的设定不仅提高了分析效率，还确保了方法的准确性与重现性。

在方法开发过程中，研究人员进行了多组实验，以优化流动相的组成、色谱柱的选择以及运行条件。最初尝试使用0.1%正磷酸与甲醇（70:30 v/v）作为流动相，但在色谱峰形状和分辨率方面未能达到理想效果。随后，通过调整流动相成分和色谱柱类型，最终确定了使用三氟乙酸与甲醇的组合，成功获得了对称的色谱峰并缩短了运行时间。实验结果表明，该方法在优化后的条件下能够有效分离Sparsentan，并确保其在样品中的准确检测。

方法的验证工作依据国际药典（ICH）指南进行，涵盖了系统适用性、特异性、灵敏度、准确度、精密度、线性范围、稳定性、鲁棒性等关键指标。在系统适用性测试中，通过六次重复进样，测得主峰的不对称因子为1.1，理论塔板数为3996.6，相对标准偏差（%RSD）为0.3，符合标准要求。此外，该方法在不同浓度水平下的回收率范围为99.19%至100.54%，进一步验证了其准确性。在精密度测试中，无论是系统精密度还是方法精密度，均表现出良好的重复性和一致性，%RSD值均低于1.0，说明该方法具有较高的稳定性和可靠性。

### 稳定性研究与降解分析

为了确保方法的稳定性，研究人员对Sparsentan在不同降解条件下进行了稳定性研究。这些条件包括水解、氧化、热降解和光降解。实验结果显示，在酸性、过氧化物和光降解条件下，Sparsentan出现了显著的降解，而碱性、中性和热降解条件下的样品则保持了较高的稳定性。这一发现表明，该方法能够有效区分药物与其降解产物，从而具备良好的稳定性指示能力。

在降解实验中，样品被置于特定的环境条件下进行处理，并在UPLC系统中进行分析。降解产物的峰纯度和质量平衡数据表明，该方法能够准确检测Sparsentan的含量，并排除其他成分的干扰。这些结果不仅验证了方法的特异性，还进一步确认了其在药品质量控制中的适用性。

### 方法的绿色评估

除了方法的性能验证，本研究还对方法的绿色度进行了评估。在制药领域，绿色化学理念越来越受到重视，以减少对环境的影响。研究人员采用多种绿色化学评估工具，包括GAPI、NEMI、Eco-scale和AGREE，对方法进行了全面分析。

GAPI（绿色分析过程指标）用于评估样品采集、制备、分析技术和确定过程中的环境影响。结果显示，该方法在绿色度评估中表现出色，尤其是在减少溶剂使用和优化实验条件方面。NEMI（新型环境影响指标）则从持久性、生物累积性和毒性（PBT）以及废物、有害物质和腐蚀性试剂等方面评估方法的环境影响。尽管在废物方面显示出较高的影响，但其他三个方面均处于绿色区域，表明该方法在很大程度上减少了对环境的负面影响。

Eco-scale方法则通过计算环境影响的惩罚点来评估方法的绿色度。根据计算结果，该方法的Eco-scale评分为77，属于高环保等级。此外，AGREE工具通过12个绿色化学原则对方法进行全面评估，结果显示其绿色度评分为0.64，表明该方法在多个方面符合绿色化学的标准。

### 方法的可持续性与适用性

本研究采用质量源于设计（QbD）工具和实验设计（DoE）方法，对方法的鲁棒性进行了系统评估。通过改变关键实验参数，如有机溶剂比例、流速和色谱柱温度，研究人员观察到这些变量对色谱峰保留时间、尾因子和理论塔板数有显著影响。实验结果表明，该方法在不同参数条件下仍能保持稳定性和准确性，说明其具有良好的适应性和耐用性。

此外，本研究还强调了方法的可持续性。通过优化流动相成分和减少溶剂使用，该方法在绿色度评估中表现出色，符合当前制药行业对环保和可持续性的要求。同时，方法的运行时间仅为3.0分钟，相较于传统的HPLC方法，大幅提高了分析效率，减少了实验时间与资源消耗。

### 方法的潜在应用与意义

综上所述，本研究开发并验证了一种高效、稳定、绿色的UPLC方法，用于测定Sparsentan在药品制剂中的含量。该方法不仅满足了ICH Q2指南的要求，还在绿色化学评估中表现出色，为制药行业的质量控制和分析提供了一种可靠的工具。此外，该方法在降解实验中表现出良好的稳定性指示能力，能够有效区分药物与其降解产物，确保药品在储存和使用过程中的质量。

Sparsentan作为一种新型的双受体拮抗剂，在治疗IgA肾病方面具有显著优势。然而，其在制药过程中的稳定性与检测方法的优化对于确保药品质量至关重要。本研究通过系统的方法开发与验证，不仅提高了检测效率，还减少了环境影响，为制药行业的绿色化学实践提供了重要参考。同时，该方法的成功应用也为进一步研究Sparsentan的药代动力学特性、降解行为及环境影响奠定了基础。

### 作者贡献

本研究由多位科学家共同完成，他们在方法开发、实验设计、数据分析和绿色评估等方面发挥了重要作用。S. Satyajit Raj Nethekar负责方法的撰写、设计和实验探究；Phani Raja Kanuparthy负责方法的审查与编辑，并提供指导；Bhukya Vijay Nayak负责数据的分析与整理；Leela Prasad Kowtharapu负责方法的撰写与软件使用；Rambabu Gundla提供了实验资源并管理项目；Naresh Kumar Katari负责方法的验证与概念设计；Sreekantha B Jonnalagadda负责方法的可视化与资金获取。这些作者的共同努力，使得本研究能够在多个方面取得突破性进展，为制药分析技术的发展做出了积极贡献。