Covid-19血清调控WJ-MSCs中NEAT1与MALAT1表达：奠定EVs介导的炎症治疗新策略

《Respiratory Research》：Modulation of NEAT1 and MALAT1 expression in WJ-MSCs by Covid-19 serum: a foundation for EVs-mediated therapy

本研究针对严重Covid-19患者存在的“细胞因子风暴”等过度炎症反应难题，探讨了沃顿胶源间充质干细胞（WJ-MSCs）及其胞外囊泡（EVs）的免疫调节机制。研究人员通过体外模拟Covid-19患者血清微环境，发现WJ-MSCs在炎症刺激下显著下调促炎长链非编码RNA（lncRNA）NEAT1和MALAT1的表达，并通过基因沉默技术证实靶向抑制这两种lncRNA可增强MSCs来源EVs的免疫抑制功能。该研究为优化EVs疗法提供了新靶点，对Covid-19及其他炎症性肺疾病的治疗具有重要临床意义。

在新冠疫情全球肆虐的背景下，重症患者常因免疫系统过度激活导致“细胞因子风暴”，进而引发急性呼吸窘迫综合征甚至死亡。尽管间充质干细胞（MSCs）及其衍生的胞外囊泡（EVs）疗法在临床试验中展现出缓解炎症的潜力，但其作用机制尚不明确，限制了疗法的优化与应用。

为揭示MSCs在Covid-19炎症环境中的响应机制，Infante等研究人员在《Respiratory Research》发表论文，通过体外模拟患者血清微环境，系统分析了沃顿胶源MSCs（WJ-MSCs）的转录组重塑及EVs功能调控。研究发现，Covid-19血清可激活WJ-MSCs的增殖与分泌功能，并特异性下调促炎lncRNA NEAT1和MALAT1的表达。进一步通过基因沉默实验证明，靶向抑制NEAT1或MALAT1能显著增强MSCs-EVs对T细胞增殖的抑制作用，提示其免疫调节潜力的提升。

关键技术方法

研究利用Covid-19住院患者血清（n=47）与健康对照血清（n=16）体外刺激WJ-MSCs，通过RNA-seq分析转录组变化，并采用锁核酸反义寡核苷酸（LNA-GapmeR）敲低NEAT1/MALAT1表达。EVs通过尺寸排阻色谱法（SEC）分离，经纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western blot（CD81/Calnexin标记）及多参数流式细胞术（MACSPlex）表征。功能验证采用CFSE标记的PBMCs增殖实验评估EVs免疫抑制活性。

研究结果

Covid-19血清 priming 激活WJ-MSCs

与对照血清相比，Covid-19血清处理的WJ-MSCs形态更圆润、颗粒增多，增殖能力显著增强（图1B-C），总RNA与分泌蛋白量上升（图1D-E）。免疫荧光显示内质网分泌通路关键蛋白Sec31a分布更聚集（图1F），抗体芯片检测到肝细胞生长因子（HGF）分泌增加（图1G），提示细胞进入激活状态。

转录组重塑揭示炎症相关通路调控

PCA分析显示Covid-19血清组与对照组转录组显著分离（图2A），但不同病情严重程度患者血清的效应无差异（图2B）。共鉴定出74个差异表达基因（图2C-D），其中ANGPTL4（血管生成素样蛋白4）上调，NEAT1与MALAT1显著下调（图2E）。通路富集分析显示脂代谢、抗炎信号通路激活，而胶原组装与炎症反应相关通路被抑制（图3A-B）。

NEAT1/MALAT1敲低增强EVs免疫调节功能

LNA-GapmeR敲低NEAT1或MALAT1后（图4C），通过SEC与超速离心分离EVs（图5A）。NTA与冷冻电镜确认EVs粒径与形态完整（图5B-C），Western blot验证CD81阳性且Calnexin阴性（图5D）。流式细胞术显示EVs表达MSCs特征标志物（CD73、CD90等）（图6B）。

功能实验表明，EVs_NEAT1与EVs_MALAT1均能显著抑制PHA诱导的T细胞增殖，且EVs_MALAT1效果更强；但双敲低EVs（EVs_NEAT1+MALAT1）未显示协同效应（图7C），提示二者可能通过独立或交叉通路调控免疫应答。

结论与意义

本研究首次揭示Covid-19血清通过下调WJ-MSCs中NEAT1与MALAT1表达，诱导其向抗炎表型转化，并证明靶向这些lncRNA可优化EVs的免疫调节功能。这一发现不仅阐明了MSCs-EVs疗法在Covid-19中的部分作用机制，还为开发基于lncRNA调控的精准EVs疗法提供了新思路，有望拓展至其他炎症性肺疾病的治疗。