外泌体作为非病毒载体，用于CRISPR/Cas12a的靶向递送，以实现HIV-1前病毒DNA的治疗性编辑

《Molecular Therapy》：Exosomes as Nonviral Carrier for Targeted Delivery of CRISPR/Cas12a for Therapeutic HIV-1Proviral DNA Editing

通过外泌体介导的靶向CRISPR-Cas12a系统（EMT-Cas12a）实现HIV-1潜伏病毒DNA的体外及体内清除，同时恢复CD4+ T细胞功能，并展现无显著脱靶效应。

　　

严马|万荣伟|杨子豪|周颖|董婷|王涛|夏学娇|马一格|周梦颖|高洋|于博宇|王长军|阮建国|柯红|顾超江

中国武汉科技大学生命科学与健康学院

摘要

目前治疗HIV感染的方法包括传统的联合抗逆转录病毒疗法（cART）和免疫疗法，这些方法可以有效抑制病毒复制，但无法清除潜伏的病毒库，尤其是存在于循环免疫细胞中的病毒。尽管CRISPR-Cas基因编辑技术为HIV-1的治疗提供了希望，但其在体内的基因传递效率仍然是一个需要克服的障碍。在这里，我们开发了一种外泌体介导的靶向CRISPR-Cas12a传递系统（EMT-Cas12a），这是一种经过工程改造的外泌体系统，能够将Cas12a的mRNA和crRNA靶向递送到CD4+ T细胞中。EMT-Cas12a系统在细胞特异性靶向、CRISPR-Cas12a表达、crRNA成熟、核内进入效率以及高效切割方面进行了优化，在细胞模型和人源化小鼠模型中均显著抑制了HIV的复制。与单crRNA策略相比，多crRNA阵列技术在HIV感染的小鼠模型、体外扩增的HIV+受试者的PBMCs以及体外细胞系中表现出更强的抗病毒效果，且这些细胞系中检测不到HIV DNA。重要的是，该系统没有出现明显的脱靶效应，并且能够在体内和体外PBMCs中恢复CD4+ T细胞的数量，显示出其在清除病毒和重建免疫系统方面的双重治疗潜力。总体而言，通过EMT-Cas12a传递系统可以在体外和体内实现HIV-1前病毒DNA的切割，这有望推动该技术向人体临床试验迈进。