流式细胞术联合检测TRBC1与TRBC2在克隆性T细胞识别中的真实世界应用研究

《American Journal of Clinical Pathology》：397?Real World Utilization of Paired TRBC1/TRBC2 by Flow Cytometry in Identification of Clonal T-Cells

为解决T细胞克隆性评估难题，研究人员开展了一项关于流式细胞术配对检测T细胞受体β链恒定区1和2（TRBC1/TRBC2）的真实世界研究。结果表明，该方法能有效区分多克隆性T细胞、意义未明的T细胞克隆（TCUS）及恶性T细胞克隆，为T细胞肿瘤的诊断提供了新的重要工具。

　　

在免疫系统的精密调控中，T细胞扮演着核心角色，其功能的正常发挥依赖于T细胞受体（TCR）的多样性。然而，当T细胞发生恶性转化时，会表现为单一T细胞群体的异常扩增，即克隆性增殖。准确识别这些克隆性T细胞群体，对于T细胞淋巴瘤等疾病的诊断、分型及预后评估至关重要。传统的T细胞克隆性检测方法，如TCR基因重排分析，虽然具有较高的灵敏度，但操作繁琐、耗时长，且难以在常规临床流式细胞术检测中实现同步分析。因此，临床实践迫切需要一种能够整合到多色流式细胞术panel中、快速且可靠的T细胞克隆性评估新指标。

近年来，研究发现T细胞受体β链恒定区（T-cell receptor beta constant, TRBC）存在两种亚型：TRBC1和TRBC2。在正常的T细胞发育过程中，每个成熟的αβ T细胞只表达其中一种亚型，从而在健康个体中形成了一个相对稳定的TRBC1与TRBC2表达比例。这一生物学特性使得TRBC1和TRBC2成为识别T细胞克隆性的理想内源性标志物——如果一个T细胞群体中绝大部分细胞只表达TRBC1或只表达TRBC2，即比例严重失衡，则高度提示该群体为单克隆来源。

为了验证这一理念在常规临床诊断中的可行性与价值，来自美国密苏里大学的研究团队Linnea Banker, Patricia Lupu, Amanda Wheeler, Yajun Liu和Richard D. Hammer进行了一项回顾性研究，他们利用包含TRBC1和TRBC2抗体的流式细胞术panel，分析了多种临床标本中T细胞的克隆状态，其研究成果发表在《American Journal of Clinical Pathology》上。

研究者采用的关键技术方法主要包括多色流式细胞术。他们设计了一个10色的单管检测方案，核心是加入了定制的TRBC2（SAM5.2）/BV421抗体，与panel中已有的TRBC1/FITC等其他抗体（如CD5、CD3、CD7、CD8、CD56、CD4、CD45、TCRγδ）联用。该方案能够在FACSLyric流式细胞仪上同步进行T细胞免疫表型分型和TRBC1/TRBC2表达分析。研究队列包含57例来自血液、骨髓和玻璃体液的临床标本。

研究结果

1. 样本克隆性分布

在分析的57例样本中，绝大多数（85.96%）表现为多克隆性T细胞，即T细胞群体呈现正常的TRBC1和TRBC2混合表达。有10.52%的样本中检测到意义未明的T细胞克隆（TCUS），即存在一个TRBC1或TRBC2限制性表达的T细胞群体，但其临床意义尚不明确，需要进一步随访。另有3.51%的样本明确诊断为克隆性T细胞恶性肿瘤。

2. 克隆性恶性肿瘤的TRBC亚型

在确诊为T细胞恶性肿瘤的克隆性样本中，TRBC1和TRBC2的表达各占50%，这表明恶性克隆可以起源于表达任一TRBC亚型的T细胞前体，进一步证实了TRBC1和TRBC2作为通用克隆性标志物的价值。

3. 多克隆样本的TRBC2/TRBC1比值基准范围

研究的一个重要贡献是建立了多克隆（正常）T细胞中TRBC2与TRBC1的比值范围，为后续判断比值是否异常提供了参考。在CD3⁺ TCRαβ T细胞中，该比值为0.761-2.824（平均值为1.655，标准差为0.481）。进一步细分T细胞亚群后发现，在CD4⁺ T辅助细胞中，比值为0.680-2.677（平均值1.574，标准差0.449）；而在CD8⁺ T杀伤细胞中，比值范围更宽，为0.596-6.114（平均值1.954，标准差1.008）。CD8⁺ T细胞比值波动较大提示在分析时需要更加谨慎，并可能需结合其他参数综合判断。

结论与意义

本研究通过在实际临床诊断场景中应用包含TRBC1和TRBC2抗体的流式细胞术panel，有力地证实了同时检测这两种亚型在评估T细胞克隆性方面的有效性和实用性。该方法能够成功区分多克隆性T细胞、意义未明的T细胞克隆（TCUS）以及明确的恶性T细胞克隆。研究所建立的多克隆T细胞TRBC2/TRBC1比值范围，为临床实验室设立内部参考区间奠定了基础，使得流式细胞术在一次性检测中既能完成免疫表型分析又能评估克隆性成为可能。

这项研究的成功，标志着T细胞克隆性检测迈向了一个新的阶段。将TRBC1/TRBC2分析整合进常规流式细胞术方案，显著简化了工作流程，缩短了报告时间，有望更快地为临床医生提供诊断信息，从而指导后续治疗。尤其对于意义未明的T细胞克隆（TCUS）的识别和监测，该方法提供了前所未有的便利性，有助于深化对这类病变自然病程的理解。总之，这项“真实世界”研究为流式细胞术在T细胞肿瘤诊断中的应用开辟了新的道路，具有重要的临床推广价值。