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通过催化发夹组装级联反应实现邻近效应,并结合自启动扩增技术,利用CRISPR技术增强对与冠心病相关的微小RNA(microRNAs)的超灵敏检测能力
《Analytical Methods》:Catalytic hairpin assembly cascade-initiated proximity with self-priming amplification for CRISPR-enhanced ultrasensitive detection of coronary heart disease-associated microRNAs
【字体: 大 中 小 】 时间:2025年11月14日 来源:Analytical Methods 2.6
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精准检测特定miRNA对冠心病早期诊断至关重要,本研究提出一种集成催化发夹组装(CHA)级联启动的邻近自引发扩增与CRISPR/Cas12a信号生成的双重扩增策略的生物传感平台,实现亚飞摩尔级检测限(0.36 fM)和双重序列验证的高特异性,经血清样本验证有效。
准确检测特定的微小RNA(miRNAs)对于冠心病的早期诊断至关重要。新兴技术,包括功能性核酸酶介导的目标扩增和DNA纳米技术,在临床诊断中具有实现精确miRNA识别的巨大潜力。本研究介绍了一种高度敏感且特异的生物传感平台,该平台结合了催化发夹组装(CHA)级联引发的邻近自启动扩增以及CRISPR/Cas12a介导的信号生成方法来实现miRNA的定量。目标miRNA会启动CHA级联反应,生成含有“ foothold ”结构的CHA产物。这一结构随后能够促进“可变引物”的延伸,进而转录出双链DNA(dsDNA)。生成的dsDNA会激活CRISPR/Cas12a,引发侧向切割和信号放大。通过这种双重扩增策略(CHA和CRISPR/Cas12a),该检测方法的检测限可低至亚飞摩尔级别(0.36 fM)。通过CHA和CRISPR/Cas12a的双序列验证,确保了极高的特异性。使用添加了miRNA的血清样本进行验证,证实了该方法能够实现精确的miRNA定量。总体而言,这种生物传感器在临床分子诊断领域展现出巨大的应用前景。
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