恶性疟原虫EBA-181配体红细胞受体之谜破解：瞄准Band 3蛋白，为疟疾疫苗设计开启新靶点

《Parasitology Research》：P. falciparum EBA-181 ligand - searching for the receptor on human erythrocytes

为破解P.falciparum EBA-181配体未知受体难题，Jod?owska等利用哺乳动物表达系统制备全段重组蛋白，证实其依赖Neu5Ac/Neu5Gc唾液酸并结合Rh2b（KD≈2 μM），首次提出Band 3为候选受体，为联合EBL-Rh多价疫苗提供新思路。

　　疟疾仍是全球头号寄生虫杀手，每年造成约2.5亿临床病例与60万死亡，其中恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）居首。尽管已有青蒿素等药物，耐药株不断出现，研发阻断入侵的疫苗被视为根治路径。疟原虫仅在数分钟内完成红细胞（RBC）入侵，关键步骤由Erythrocyte binding-like（EBL）与Reticulocyte binding-like（RBL）两大家族介导。EBL家族中EBA-175、EBL-1、EBA-140的受体已明确为糖蛋白A（GPA）、B（GPB）、C（GPC），唯独EBA-181的“受体Z”三十年悬而未决，成为疟疾入侵机制的最后一块拼图。未知受体不仅阻碍完整入侵通路的描绘，也使潜在疫苗靶点缺失一角。为此，波兰Hirszfeld免疫与实验疗法研究所与Zielona Góra大学团队启动EBA-181配体“寻亲”计划，试图锁定其红细胞表面受体并评估与Rh家族协同关系，结果发表于2025年《Parasitology Research》。

研究采用四项关键技术：1）人胚肾HEK293F哺乳动物表达系统制备EBA-181及Rh2b重组全段外域；2）表面等离子共振（SPR）定量蛋白-糖及蛋白-蛋白相互作用；3）流式细胞术（FACS）检测重组Region II片段与完整RBC结合；4）远Western（Overlay）联合质谱（MS）鉴定膜靶蛋白。

表达与纯化 由于全段EBA-181外域表达量极低且多聚集于非溶解性胞内组分，作者改用细菌系统制备Region II（RII）片段进行功能实验；Rh2b外域则成功分泌至上清，经Ni-NTA一步纯化获得可溶蛋白，为后续互作分析提供材料。

配体结合特异性 FACS显示RII以剂量依赖但较弱信号结合人RBC，提示受体可能为低丰度或隐蔽构象。SPR进一步揭示RII可识别Neu5Ac与Neu5Gc两种唾液酸，对半乳糖结合微弱，对岩藻糖无作用，证实EBA-181与其他EBA成员一样依赖唾液酸。

与Rh2b的协同 基于此前基因敲除表型提示EBA-181与Rh2b功能偶联，SPR直接测得RII-Rh2b平衡解离常数KD≈2 μM，与Rh4-CR1相互作用强度相当，说明两蛋白可形成入侵复合物，为“多配体协同”模型再添实据。

受体鉴定 远Western显示RII不与糖蛋白A、B、C结合，却识别分子量≥100 kDa的RBC膜带；该带经切胶MS主要回收到Band 3（SLC4A1）肽段。Band 3是红细胞最丰富的跨膜糖蛋白（约100万拷贝/细胞），其胞外袢含Asn642 N-糖链，可携带多聚乳糖胺及末端唾液酸，正好契合EBA-181的糖结合特性，因而被提出为最具可能的受体。

结论与讨论 本研究首次用哺乳动物系统表达EBA-181全段，结合生物物理与蛋白质组学手段，证明：1）EBA-181通过RII域依赖唾液酸；2）其与Rh2b可直接结合，提示EBL-Rh联合封锁策略；3）Band 3为EBA-181候选受体，补齐EBL家族受体图谱。鉴于Band 3 abundance高且已证实可被疟原虫利用，针对其糖肽表位设计抑制剂或疫苗抗原，有望与EBA-175、Rh5等组分构成多价疫苗，克服因受体冗余导致的免疫逃逸。该发现也为解释为何某些蛋白酶处理实验呈现“胰蛋白酶抵抗、糜蛋白酶与神经氨酸酶敏感”的经典表型提供了分子基础，为未来疟疾干预提供新靶点与新思路。