《Discover Pharmaceutical Sciences》：Evaluation of the anti-angiogenic property of uvaol: in silico, in vitro, and in ovo approaches
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为破解ESCC对单一PI3K或mTOR抑制剂响应率低之困局，作者系统评估BKM120与RAD001双靶阻断的协同效应，发现其通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号、下调c-Myc并诱导ROS依赖性凋亡，显著抑制细胞增殖及PDX瘤体生长，为临床提供可快速转化的精准联合策略。
论文解读
食管癌是全球第六大癌症死亡原因，食管鳞状细胞癌（ESCC）占我国病例90%以上，五年生存率不足20%。尽管免疫检查点抑制剂带来曙光，但客观缓解率仍低于30%，且缺乏有效靶向药物。PI3K/AKT/mTOR轴在ESCC中异常激活，与化疗耐药及转移密切相关；然而Ⅰ/Ⅱ期试验显示，单一PI3K或mTOR抑制剂仅使不到10%患者获益，提示亟需联合策略。
为回答“双靶阻断能否克服耐药并产生协同效应”这一关键问题，郑州大学第一附属医院张卫国教授团队与中美多家机构合作，在《Discover Pharmaceutical Sciences》发表研究，系统评估泛PI3K抑制剂BKM120与mTOR抑制剂RAD001的联合活性。作者首先利用6株ESCC细胞系、2株正常食管上皮细胞及112例临床组织芯片，证实PI3K/AKT/mTOR轴高频激活；随后通过体外增殖、克隆形成、Annexin V/PI凋亡检测及JC-1线粒体膜电位实验，发现BKM120与RAD001在低至中等浓度下呈显著协同（联合指数CI<0.7）。机制层面，RNA-seq与Western blot揭示双药协同抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR及下游p-4E-BP1，同时下调转录因子c-Myc并升高胞内ROS水平；N-乙酰半胱氨酸（NAC）可部分逆转凋亡，证实ROS依赖性。动物实验方面，作者构建3例ESCC患者来源异种移植（PDX）模型，随机给予溶剂、BKM120（30 mg kg）、RAD001（2 mg kg)或双药，结果显示联合组肿瘤体积抑制率高达82%，显著优于单药组（p<0.01），且未增加小鼠体重下降或肝肾毒性。免疫组化进一步证实Ki-67降低、cleaved-caspase 3升高，与体外结果一致。
关键技术方法
人ESCC细胞系、临床组织芯片、RNA测序、Western blot、Annexin V/PI流式凋亡、JC-1线粒体膜电位、ROS荧光探针、CI联合指数分析、NAC救援实验、ESCC-PDX模型（郑州大学第一附属医院收集的未经治疗患者手术标本）。
研究结果
PI3K/AKT/mTOR轴在ESCC中异常激活
通过112例组织芯片IHC发现，p-AKT与p-mTOR高表达分别占68%与61%，且与TNM分期正相关，提示该通路是潜在干预靶点。
BKM120与RAD001协同抑制ESCC细胞增殖
6株ESCC细胞的72 h增殖实验显示，单药IC分别为1.2–3.4 μM（BKM120）与4.8–9.7 nM（RAD001），而联合用药将IC降低至0.3–0.8 μM与0.9–2.1 nM，CI值0.4–0.7，呈显著协同。
联合诱导ROS依赖性凋亡
双药联合使ROS水平升高2.8倍，JC-1检测显示线粒体膜电位下降42%，Annexin V阳性细胞比例由8%升至37%；NAC预处理可恢复膜电位并减少凋亡至18%，证实ROS为关键介导因子。
下调c-Myc并抑制下游翻译
RNA-seq GSEA分析提示“Myc target”基因集显著富集下调；Western blot显示c-Myc蛋白下降55%，其下游核糖体蛋白RPL23a表达同步降低，提示翻译抑制参与协同效应。
PDX模型验证协同疗效与安全性
3例PDX模型中，联合组终点瘤重分别为单药组的38%与41%，TUNEL检测显示凋亡指数升高3.2倍；血清ALT、Cr及小鼠体重无显著差异，提示治疗窗口良好。
结论与讨论
该研究首次在ESCC中证实，PI3K与mTOR双靶阻断可产生协同抗瘤效应，其机制涉及抑制PI3K/AKT/mTOR信号轴、下调c-Myc、升高ROS并诱导线粒体依赖性凋亡；PDX模型进一步验证了临床转化潜力。相比既往单药试验，本策略突破“反馈激活”导致的耐药瓶颈，且未增加明显毒性，为即将开展的Ⅰb/Ⅱa临床试验奠定理论及剂量基础。未来可通过生物标志物筛选p-AKT高表达患者，实现精准联合靶向治疗，改善ESCC预后。
