LTCONS_00014107-miR-29b-2-3p-GPR37轴调控热刺激诱导食管鳞癌发生的新机制

《Cancer Cell International》：LTCONS_00014107-miR-29b-2-3p-GPR37 axis promotes heat stimulation induced esophageal carcinogenesis

本研究针对热食热饮诱发食管鳞癌(ESCC)的分子机制展开探索，通过构建热刺激大鼠模型及RNA-seq筛选，首次揭示了LncRNA LTCONS_00014107作为miR-29b-2-3p前体，通过降解促进miR-29b-2-3p表达，进而靶向抑制GPR37，最终驱动ESCC恶性进展的调控轴。该发现为ESCC的热相关病因学提供了实验依据，并为临床防治提供了潜在靶点。

热浪下的隐忧：烫食如何点燃食管癌的导火索？

滚烫的茶汤、热腾腾的汤羹，这些日常饮食背后隐藏着不容忽视的健康危机。全球流行病学数据显示，高温饮食是食管鳞状细胞癌(ESCC)的重要风险因素，伊朗的热茶文化、南美的马黛茶习俗、中国林州的烫饮习惯，均与ESCC高发区高度重叠。尽管热刺激与ESCC的关联已被多次证实，但其分子机制始终笼罩在迷雾中。

为揭开这一谜题，Liu等人在《Cancer Cell International》发表的研究中，模拟人类烫食习惯，构建了大鼠食管热刺激致癌模型，通过RNA测序(RNA-seq)技术绘制了非编码RNA调控图谱，首次揭示了一条由长链非编码RNA(LncRNA)、microRNA(miRNA)及其靶基因构成的分子轴在热诱导ESCC中的关键作用。

关键技术方法概览

研究采用NMBA(亚硝基甲基苄胺)联合65℃热水灌胃构建大鼠食管癌前病变模型，通过RNA-seq筛选差异表达的LncRNA与miRNA；利用qRT-PCR、细胞热刺激实验、基因敲降/过表达技术验证分子功能；通过生物信息学预测与双荧光素酶报告基因实验确认miRNA与靶基因的互作；结合细胞增殖、克隆形成、免疫荧光、小鼠异种移植模型等多维度验证表型。人食管组织样本来源于河南肿瘤医院。

热刺激激活致癌轴：从动物模型到分子机制

NMBA诱导的热刺激大鼠食管黏膜癌前病变

研究通过五组大鼠实验（包括常温对照组、热水灌胃组、NMBA致癌剂联合不同温度水处理组）发现，65℃热水长期刺激可显著促进NMBA诱导的食管黏膜增生与不典型增生。RNA-seq分析筛选出44个已知LncRNA和52个新LncRNA在热刺激下差异表达，其中LTCONS_00014107在热诱导癌组织中显著下调。

LTCONS_00014107降解促进miR-29b-2-3p表达

序列分析显示，LTCONS_00014107包含miR-29b-2-3p的前体序列，且两者位于同一染色体位点(13q27)。在热刺激的RS1细胞中，LTCONS_00014107表达先短暂升高后持续下降，而miR-29b-2-3p则延迟上调。加入转录抑制剂放线菌素D(Act D)后，LTCONS_00014107快速降解，miR-29b-2-3p表达进一步升高，证实LTCONS_00014107是miR-29b-2-3p的前体，其降解可释放miR-29b-2-3p。

miR-29b-2-3p在ESCC中的致癌作用

miR-29b-2-3p序列在人类、大鼠、小鼠中高度保守（100%同源）。热刺激人胚胎食管上皮细胞(SHEE)后，miR-29b-2-3p表达显著升高。在ESCC细胞系中，miR-29b-2-3p普遍高表达，且与患者预后不良相关。组织原位杂交(ISH)显示，miR-29b-2-3p在高级别癌前病变和癌组织中表达显著升高。功能实验表明，敲降miR-29b-2-3p可抑制KYSE30、KYSE410、KYSE510细胞的增殖与克隆形成，而过表达则促进恶性表型。

GPR37是miR-29b-2-3p的直接靶基因

通过TargetScan、miRWalk等数据库交叉预测，并结合双荧光素酶报告基因实验，发现GPR37的3'-UTR存在miR-29b-2-3p结合位点。突变该位点后，miR-29b-2-3p对GPR37的抑制作用消失。在ESCC细胞中，miR-29b-2-3p敲降可上调GPR37表达，而过表达则下调GPR37。免疫荧光与免疫组化进一步验证GPR37在miR-29b-2-3p高表达组织中低表达，且其高表达与患者生存率正相关。

体内实验验证miR-29b-2-3p的促癌功能

在小鼠异种移植模型中，敲降miR-29b-2-3p的KYSE30细胞成瘤能力显著减弱，肿瘤体积与重量均低于对照组，证实miR-29b-2-3p在体内促进ESCC生长。

结论与展望：热刺激致癌轴的临床意义

本研究首次阐明LTCONS_00014107-miR-29b-2-3p-GPR37轴在热诱导ESCC中的核心作用：长期热刺激导致LncRNA LTCONS_00014107降解，释放miR-29b-2-3p，后者通过靶向抑制GPR37（一种可能参与细胞周期调控的G蛋白偶联受体），驱动食管上皮细胞恶性转化。该轴不仅揭示了热食致ESCC的分子通路，还为开发以LTCONS_00014107或miR-29b-2-3p为靶点的干预策略提供了理论依据。未来研究可进一步探索GPR37在ESCC中的具体功能，以及该轴在其他热相关肿瘤（如胃癌）中的普适性。