一种稳健的稳定性指示RP-HPLC方法的开发与验证：用于美沙拉嗪制剂定量分析

《BMC Chemistry》：Design and validation of a robust stability-indicating reversed-phase HPLC method for quantification of mesalamine in formulated drug products

本研究针对美沙拉嗪（Mesalamine）在炎症性肠病治疗中存在的化学稳定性差、降解产物干扰定量准确性等问题，开发并验证了一种高灵敏度、高特异性的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法。该方法在C18色谱柱上以甲醇-水（60:40）为流动相，线性范围10–50 μg/mL（R2 = 0.9992），回收率99.05%–99.25%（%RSD < 0.32%），且能有效分离美沙拉嗪及其酸、碱、氧化、热、光解胁迫下的降解产物。研究成果为美沙拉嗪制剂的质量控制与稳定性监测提供了可靠工具，对保障临床疗效与 regulatory compliance 具有重要意义。

　　

美沙拉嗪（Mesalamine），又称5-氨基水杨酸（5-ASA），是治疗炎症性肠病（IBD）如溃疡性结肠炎和克罗恩病的核心药物。其通过局部抗炎和抗氧化作用缓解肠道黏膜损伤，但因其化学结构敏感、治疗窗窄，且在储存或体内环境中易受水解、氧化、光照等因素影响而降解，严重影响疗效与安全性。因此，开发能准确区分药物与降解产物的稳定性指示分析方法（SIAM）成为药学质量控制的关键挑战。

本研究由Ashish Sriram Mishra与Manimaran Vasanthan合作，在《BMC Chemistry》发表论文，旨在建立一种可靠的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，用于美沙拉嗪原料药及制剂（如Mesacol?片剂）的定量分析与稳定性监测。研究遵循ICH Q2(R2)指南，通过系统优化色谱条件、验证线性范围、准确度、精密度、稳健性及特异性，并开展强制降解实验，模拟极端环境以评估方法的稳定性指示能力。

关键技术方法包括：采用Shimadzu UFLC系统与C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm, 5 μm），以甲醇-水（60:40）为流动相，流速0.8 mL/min，紫外检测波长230 nm；通过标准曲线法（10–50 μg/mL）评估线性，标准添加法计算回收率；通过调整流速（±0.1 mL/min）、柱温（±2°C）和波长（±2 nm）验证稳健性；并利用酸（0.1 N HCl）、碱（0.1 N NaOH）、氧化剂（3% H₂O₂）、热（80°C）和紫外光（254 nm）胁迫实验考察降解行为。

线性关系与灵敏度

研究显示，美沙拉嗪在10–50 μg/mL范围内线性优异，回归方程y = 173.53x – 2435.64，R² = 0.9992。检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.22 μg/mL和0.68 μg/mL，表明方法适用于低浓度样本分析。

准确度与精密度

通过加标回收实验，三个浓度水平（30、40、50 μg/mL）的平均回收率为99.05%–99.25%，%RSD均低于0.32%。日内与日间精密度%RSD分别不超过0.74%和0.69%，符合ICH标准。

稳健性验证

在流速、柱温和波长微小变动下，系统适用性参数（如保留时间、塔板数）的%RSD均低于2%，证明方法适应实验室操作波动。

强制降解与特异性

美沙拉嗪在酸（0.1 N HCl）和紫外光（254 nm）胁迫下未出现降解峰，显示良好稳定性；而在碱（0.1 N NaOH）胁迫下约55%药物降解，生成保留时间12.332 min的降解产物；氧化条件（3% H₂O₂）下约10%降解，产生Rt 2.4 min的降解峰；热胁迫（80°C）则导致完全降解，出现三个明显降解峰（D1–D3）。所有条件下主峰与降解峰均完全分离，证实方法特异性强。

实际样品分析

对市售Mesacol?片剂（800 mg）的测定显示平均含量为99.91%，偏差小于0.1%，验证了方法在真实制剂中的适用性。

本研究成功开发了一种符合ICH指南的稳定性指示RP-HPLC方法，其高线性、精准度、稳健性及降解产物分离能力，为美沙拉嗪制剂的质量控制与稳定性评估提供了标准化工具。该方法不仅能监测药物在生产和储存中的化学完整性，还可应用于仿制药一致性评价与临床样本分析，对提升炎症性肠病治疗的安全性与有效性具有重要实践意义。