不同Cy5标记的脱氧嘧啶核苷同时掺入合成的DNA链中

《Molecular Biology》：Simultaneous Incorporation of Different Cy5-Labeled Deoxypyrimidine Nucleotides into a Synthesized DNA Chain

荧光标记dUTP/dCTP在PCR中的协同抑制效应研究。通过比较八种Cy5标记的dUTP/dCTP对扩增效率、产物产量及荧光掺入密度的影响，发现同时等摩尔添加比单独添加的抑制效应更小，为荧光标记PCR技术提供了灵敏度提升方案，适用于DNA微阵列检测技术。

　　

摘要

在利用Taq聚合酶对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）基因组DNA进行PCR反应的过程中，比较了八种荧光标记的脱氧尿苷三磷酸（Cy5-dUTP）和脱氧胞苷三磷酸（Cy5-dCTP）的底物特性。这些化合物均为含有相似花青素取代基的dU–dC对，在PCR反应中同时引入这些化合物。不同类型的Cy5-dUTP和Cy5-dCTP对在氮碱基与荧光团之间、以及季铵基团与Cy5荧光团的第二个杂环之间具有不同长度的连接基团。实验测定了它们的扩增效率、产物产量以及标记物的掺入密度。结果表明，当以等摩尔浓度同时引入Cy5修饰的dU和dC时，其抑制作用与浓度并不成正比，这与单独引入荧光标记的dNTP的情况不同。这一发现表明，在基于荧光信号检测的方法中（例如DNA微阵列技术），通过同时引入Cy5修饰的dU和dC可以提高检测灵敏度。