Qβ病毒样颗粒封装内体TLR激动剂：TLR7/8双重激动剂通过浆细胞样树突状细胞直接接触增强T细胞活化的机制研究

《BMC Immunology》：In vitro characterization of cellular responses elicited by endosomal TLR agonists encapsulated in Qβ virus-like particles

本研究针对内体TLR激动剂在病毒样颗粒（VLP）中的免疫激活特性尚不明确的问题，系统评估了TLR7a、TLR9a及TLR7/8a三种Qβ VLP对免疫细胞的激活效应。结果表明，TLR7/8a VLP通过促进浆细胞样树突状细胞（pDC）与T细胞直接接触，显著增强CD4+/CD8+T细胞活化，且其效果优于临床在研的TLR9a VLP（Vidutolimod），为癌症免疫治疗提供了新策略。

　　

在癌症免疫治疗领域，树突状细胞（DC）作为连接天然免疫与适应性免疫的桥梁，其功能状态直接决定抗肿瘤T细胞应答的强度。然而，肿瘤微环境（TME）中DC数量不足及功能抑制，限制了现有免疫疗法的疗效。Toll样受体（TLR）激动剂能够激活DC，但其临床转化面临稳定性差、靶向性弱等挑战。病毒样颗粒（VLP）封装技术可保护激动剂免于降解，并借助抗体介导的调理作用增强抗原呈递细胞（APC）的摄取。目前，TLR9激动剂VLP（Vidutolimod）已进入联合PD-1抑制剂的临床试验，但TLR7/8激动剂VLP的免疫激活特性及机制仍不明确。

为系统比较不同内体TLR激动剂VLP的免疫激活效能，Hasibuzzaman等人在《BMC Immunology》发表研究，通过体外实验揭示TLR7/8a VLP通过pDC直接接触机制显著增强T细胞活化的新机制。

关键技术方法

研究使用健康人外周血单个核细胞（PBMC）为模型，通过流式细胞术检测免疫细胞表面标志物（CD69、CD40）及细胞内细胞因子（IFNα、TNFα、IFNγ）；采用ELISA分析培养上清细胞因子水平；利用磁珠分选及Transwell共培养模型明确pDC与T细胞的相互作用依赖直接接触；通过中和抗体阻断实验验证TNFα在T细胞活化中的部分作用。

研究结果

1. 内体TLRa VLPs触发IFNα和TNFα的释放

TLR7a、TLR9a及TLR7/8a VLPs均能诱导PBMC分泌IFNα，但TLR7/8a VLPs在10 μg/mL和50 μg/mL剂量下显著促进TNFα和IFNγ分泌，且效果优于单一激动剂VLPs（图1）。

2. 内体TLRa VLPs激活免疫细胞

三种VLPs均能激活单核细胞和pDC，但TLR7/8a VLPs在低剂量（1 μg/mL）即可显著激活CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞，且效果优于TLR9a VLPs（图2）。

3. 内体TLRa VLPs诱导免疫细胞产生细胞因子

TLR7/8a VLPs显著增加单核细胞、pDC和髓样DC（mDC）中IFNα⁺和TNFα⁺细胞比例，而NK细胞是IFNγ的主要来源（图3）。TLR9a VLPs仅激活pDC，提示TLR7/8双重激动具有更广的APC激活谱。

4. TNFα部分介导TLR7/8a VLP诱导的T细胞活化

TNFα中和抗体（非IFNα抗体）可部分抑制TLR7/8a VLP介导的CD4⁺/CD8⁺T细胞活化，提示TNFα与其他因子（如IL-12）共同参与T细胞激活（图4）。

5. TLR7/8a VLP介导的T细胞活化依赖抗原呈递细胞

纯化T细胞直接暴露于TLR7/8a VLPs未被激活，而APC耗竭完全 abolished T细胞活化，证实其间接激活机制（图5）。

6. TLR7/8a VLP通过pDC直接接触激活T细胞

pDC与T细胞共培养时TLR7/8a VLPs诱导的T细胞活化最强，且Transwell实验表明该过程依赖细胞直接接触，而非可溶性因子（图6、7）。

结论与意义

本研究首次阐明TLR7/8a VLP通过pDC直接接触机制高效激活T细胞，其效果优于临床在研的TLR9a VLP。该策略不仅拓宽了内体TLR激动剂的免疫激活谱，还揭示了pDC在介导T细胞活化中的核心地位。结合TLR7/8a VLP对NK细胞的强效激活，其有望与抗体药物（如西妥昔单抗）联用增强抗体依赖性细胞毒性（ADCC），为克服肿瘤免疫耐受提供了新思路。尽管研究局限于体外模型，但为TLR7/8a VLP的临床转化奠定了理论基础，未来需在体内模型中验证其抗肿瘤效能及记忆T细胞诱导能力。