芬兰队列扩展免疫分型儿科参考范围的建立及其在原发性免疫缺陷病诊断中的验证

《Journal of Clinical Immunology》：Evaluating Pediatric Reference Ranges for Extended Immunophenotyping from a Finnish Cohort against Published References

本研究针对儿童免疫分型诊断中缺乏年龄匹配参考值的问题，通过对68名0-12岁健康芬兰儿童进行流式细胞术分析，建立了淋巴细胞亚群和树突状细胞的年龄特异性参考范围。研究发现儿童淋巴细胞对有丝分裂原刺激反应弱于成人，且与初始T细胞比例呈负相关。与46例IEI患者数据对比验证了参考范围的临床实用性，为儿科免疫疾病实验室诊断提供了重要依据。

　　

在儿童免疫系统发育的关键时期，淋巴细胞亚群的精确评估对原发性免疫缺陷病（IEI）的诊断至关重要。然而，临床实践长期面临一个突出难题：缺乏可靠的年龄匹配参考值标准。由于儿童免疫系统随年龄增长发生剧烈变化，初始T细胞和胸腺近期迁出细胞（RTE）在婴幼儿期达到峰值后逐渐下降，而记忆细胞随免疫系统成熟和病原体暴露逐渐增加，使用成人参考值可能导致儿童免疫状态的误判。

为解决这一临床诊断瓶颈，赫尔辛基大学研究团队在《Journal of Clinical Immunology》发表最新研究，通过对68名0-12岁健康芬兰儿童进行前瞻性队列研究，建立了全面的淋巴细胞亚群参考值，并与全球已发表数据和46例IEI患者进行对比验证。研究首次系统评估了儿童淋巴细胞刺激反应（FASCIA）的年龄特异性特征，为儿科免疫实验室诊断提供了重要标准。

研究采用流式细胞术（FACS Canto/Lyric系统）进行淋巴细胞亚群分析，样本来自赫尔辛基新儿童医院接受择期手术的健康儿童队列。通过FASCIA方法评估淋巴细胞对有丝分裂原（PHA、ConA）的刺激反应，采用非参数百分位数法（P10-P90）建立参考区间，并与177名成人供体数据对比。

评估年龄匹配参考值

研究显示总淋巴细胞计数随年龄增长而下降，初始T细胞减少而记忆T细胞（TEM、TCM、TEMRA）增加。B淋巴细胞区室呈现相同规律，初始B细胞在幼儿期占主导，记忆B细胞随年龄增长。树突状细胞区室在整个儿童期保持相对稳定。通过连续参考范围模型显示，RTE细胞计数在儿童期呈指数衰减。

参考值研究存在显著的统计和方法学差异

文献回顾发现13项T细胞研究和12项B细胞研究在统计区间选择（百分位数范围、耐受区间）和细胞亚群定义上存在显著差异。耐受区间产生的参考范围明显宽于百分位数法，而各研究间中位数值相对一致，表明实验室方法差异是参考值变异的主要来源。

CHH患者γδT细胞增加而多数IEI初始T细胞减少

IEI队列分析显示，软骨-毛发发育不全（CHH）患者全部出现γδT细胞增高，83%患者RTE低于参考范围。22q11.2缺失综合征患者中，62%出现γδT细胞低于参考范围。联合免疫缺陷（CID）和常见变异型免疫缺陷病（CVID）患者主要表现为初始CD4+ T细胞和RTE减少。

CID和CVID患者初始B细胞和过渡B细胞增加而记忆B细胞减少

CID和CVID队列显示初始B细胞和过渡B细胞高于参考范围，而总记忆B细胞、转换记忆B细胞（smB）和非转换记忆B细胞（nsmB）低于参考范围。抗体缺陷患者中60%出现初始B细胞增高，40%过渡B细胞增高。

儿童淋巴细胞刺激反应弱于成人

FASCIA检测显示儿童对有丝分裂原的反应强度显著低于成人。相关性分析发现FASCIA评分与初始T细胞（r=-0.604）、RTE细胞（r=-0.635）呈强负相关，与记忆T细胞百分比呈中等正相关（r=0.460），表明儿童较弱刺激反应与其较高的初始淋巴细胞比例相关。

研究建立了北欧地区首个完整的儿童扩展免疫分型参考值体系，证实CHH患者中γδT细胞和双阴性T细胞（DNT）增高可能作为免疫失调的生物标志物。儿童FASCIA检测参考范围的建立解决了长期存在的年龄相关刺激反应差异的解读难题。尽管淋巴细胞免疫分型仍缺乏全球标准化，但本研究通过方法学透明化和多维度验证，为儿科免疫实验室诊断提供了可靠工具，有望提高IEI的早期诊断准确性。