ARID3A通过激活TNF-α/NF-κB信号通路促进双表型肝细胞癌的肿瘤进展

《Journal of Hepatocellular Carcinoma》：ARID3A Promotes Tumor Progression by Activating TNF-α/NF-κB Signaling in Dual-Phenotype Hepatocellular Carcinoma

DPHCC是一种具有干细胞特性的肝细胞癌亚型，ARID3A通过激活TNF-α/NF-κB信号通路促进其侵袭性和干细胞特征，且与患者预后显著相关。

　　肝细胞癌（HCC）是一种高度异质性的恶性肿瘤，其治疗效果仍不理想，即便采用了根治性治疗方法。这种不理想的结果与癌细胞的特性密切相关，尤其是癌症干细胞（CSCs）在肿瘤复发和影响患者长期生存方面的作用。在HCC中，CSCs的自我更新能力和侵袭性是肿瘤发展的关键因素，而双表型肝细胞癌（DPHCC）作为HCC的一个独特亚型，具有CSC的特征，且表现出更强的侵袭性和不良预后。本研究旨在探讨ARID3A在DPHCC中的作用机制，以及其如何通过调控炎症信号通路影响肿瘤的恶性行为。

ARID3A是AT-rich交互域（ARID）家族的一个成员，是一种DNA结合蛋白，参与细胞周期调控、转录调控以及可能的染色质结构修饰。在多种恶性肿瘤中，ARID3A的高表达与不良预后相关，同时其还能促进肿瘤细胞的干细胞特性，增强侵袭和转移能力。在HCC中，ARID3A也被发现是一个协同转录因子，能够调控干细胞标志物的表达，且其高表达与较差的临床结局有关。因此，本研究聚焦于ARID3A在DPHCC中的表达水平及其对肿瘤干细胞特性和侵袭性的影响。

通过转录组分析和组织表达检测，研究发现ARID3A在DPHCC中的表达显著上调。在临床样本中，高表达的ARID3A与较差的预后密切相关，这提示ARID3A可能在DPHCC的发病机制中扮演重要角色。为了进一步验证这一发现，研究团队采用了多种实验方法，包括体外功能实验和体内肿瘤生成实验。在体外实验中，通过构建ARID3A过表达和敲低的HCC细胞系，研究者发现ARID3A的表达水平与细胞迁移和侵袭能力密切相关。具体而言，抑制ARID3A表达能够显著降低Huh7和Hep3B细胞的迁移率，而过表达ARID3A则增强SNU449细胞的迁移和侵袭能力。这些结果表明ARID3A在HCC细胞的恶性行为中起着关键作用。

为了深入理解ARID3A如何调控肿瘤的干细胞特性，研究团队还进行了克隆形成和CCK-8实验，评估ARID3A对HCC细胞增殖能力的影响。结果显示，ARID3A的敲低显著抑制了Huh7和Hep3B细胞的增殖能力，而SNU449细胞在ARID3A过表达后并未表现出显著的增殖变化，这可能与不同细胞系对ARID3A的反应性差异有关。此外，通过WB实验和球体形成实验，研究者发现ARID3A的表达水平与CSC标志物如CK19和CD133的表达密切相关，这进一步支持了ARID3A在调控肿瘤干细胞特性中的作用。

在体内实验中，研究团队使用Huh7和Hep3B细胞构建了异种移植模型，观察ARID3A对肿瘤生长的影响。结果显示，ARID3A的敲低显著抑制了异种移植肿瘤的生长，这表明ARID3A在维持肿瘤的侵袭性和生长能力方面具有重要作用。这些实验结果不仅揭示了ARID3A在DPHCC中的表达上调，还证实了其在促进肿瘤恶性行为中的功能。

为了进一步探索ARID3A的调控机制，研究团队对ARID3A转染的细胞进行了RNA测序分析，以识别其调控的基因表达模式。结果表明，ARID3A的表达上调与多个干细胞相关基因的表达增强有关，同时这些基因也参与了上皮-间质转化（EMT）过程。EMT是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的重要机制，因此ARID3A可能通过调控EMT相关基因的表达，促进肿瘤的侵袭性。此外，研究还发现ARID3A的表达上调与TNF-α/NF-κB信号通路的激活密切相关。TNF-α是一种促炎因子，能够通过激活NF-κB信号通路促进肿瘤的侵袭和转移。在实验中，通过使用TNF-α蛋白或NF-κB抑制剂进行干预，研究者发现这些信号通路的调控能够显著影响ARID3A介导的侵袭性和干细胞特性。这表明ARID3A可能通过激活TNF-α/NF-κB信号通路，促进肿瘤的恶性行为。

为了验证这一假设，研究团队进一步进行了WB实验，检测了ARID3A、NF-κB、CSC标志物以及EMT相关蛋白的表达变化。结果显示，TNF-α的激活能够部分逆转ARID3A和NF-κB的表达抑制，同时也能促进CSC标志物和EMT相关蛋白的表达。而使用NF-κB抑制剂处理SNU449细胞后，ARID3A和TNF-α的表达水平均显著下降，且细胞的侵袭能力受到抑制。这些结果表明，ARID3A通过调控TNF-α/NF-κB信号通路，影响肿瘤的侵袭性和干细胞特性。

本研究的讨论部分指出，虽然已经明确了ARID3A在DPHCC中的表达上调及其对肿瘤恶性行为的影响，但其具体的调控机制仍需进一步研究。此外，研究还提到本研究存在一些局限性，例如HCC队列的样本量较小，缺乏验证队列，以及未来需要更多的体外实验或原位小鼠模型来验证针对ARID3A–TNF-α/NF-κB轴的治疗策略的有效性。研究团队强调，ARID3A在炎症诱导的肿瘤干细胞特性和侵袭性中的作用可能为DPHCC的治疗提供了新的靶点和思路。

在伦理声明中，研究团队确认本研究已获得广西医科大学肿瘤医院伦理委员会的批准，并遵循了《赫尔辛基宣言》的要求。所有纳入研究的患者均在术前签署了书面知情同意书。动物实验也遵循了广西医科大学动物中心的伦理和法律规范，确保实验的科学性和伦理性。

作者贡献部分提到，所有作者都对本研究的各个方面做出了重要贡献，包括研究设计、数据获取与分析、文章撰写和修改，以及最终的审阅和批准。所有作者均同意发表该文章，并对研究的所有方面负责。在披露部分，研究团队声明没有利益冲突。数据共享声明指出，RNA测序数据可在合理请求后从通讯作者（Xiang Bangde）处获得。

综上所述，本研究揭示了ARID3A在DPHCC中的重要作用，不仅在促进肿瘤干细胞特性和侵袭性方面表现出显著功能，还通过调控TNF-α/NF-κB信号通路影响肿瘤的恶性行为。这些发现为未来DPHCC的治疗策略提供了新的思路，即通过干预ARID3A–TNF-α/NF-κB轴来抑制肿瘤的侵袭性和干细胞特性，从而提高患者的生存率和治疗效果。然而，为了更全面地理解ARID3A的调控机制及其在DPHCC中的具体作用，还需要进一步的研究，包括更大的样本量、更多的体外实验以及原位小鼠模型的构建，以验证其在临床治疗中的应用前景。