高效分析蛋白A柱，用于高灵敏度的单克隆抗体滴度分析

《Analytical Chemistry》：High-Efficiency Analytical Protein A Columns for High Sensitivity Monoclonal Antibody Titer Analysis

分析型Protein A色谱柱采用3.5 μm非多孔颗粒填装，有效减少轴向弥散和质量传递引起的峰展宽，实现三倍峰窄、灵敏度显著提升，动态结合容量达62%，回收率>98%，适用于高通量生物监测。

　　

使用含有直径为20微米或更大孔隙颗粒的分析型Protein A亲和色谱HPLC柱来定量单克隆抗体（mAbs）是生物过程分析中的常用方法。然而，这种方法的局限性在于运行时间较长、色谱峰较宽以及灵敏度较低。为了解决这些问题，我们开发了一种新型分析型Protein A柱，该柱采用有机硅改性的材料填充了3.5微米的无孔颗粒，旨在减少mAbs的非特异性结合，从而实现快速、可重复且高灵敏度的测量。实验和理论结果表明，较小的无孔颗粒能够降低分析物的轴向扩散和与质量传递相关的色谱峰宽化现象。这使得色谱峰的宽度比使用20微米全孔颗粒时窄了三倍，同时峰高也更高。尽管装有3.5微米无孔颗粒的色谱柱的表面积仅约为20微米全孔颗粒的十分之一，Protein A的密度也降低了50%，但在10%的样品穿透量下，其动态结合能力仍比相同尺寸但填充20微米孔颗粒的色谱柱高出62%。这表明，在全孔颗粒中，并非所有的可用表面积或配体结合位点都能被有效利用。两种色谱柱在分析规模下的回收率均超过98%，且样品残留量（carryover）低于0.3%。采用3.5微米无孔颗粒显著提升了分析型Protein A色谱法的速度、灵敏度和效率，使其适用于高通量生物过程的监测。