移植肾病理新突破：多价免疫球蛋白鸡尾酒抗体联合C3/C1q检测在免疫复合物沉积诊断中的价值

《Surgical and Experimental Pathology》：Evaluating the utility of anti-human IgA, IgG, IgM, Kappa, Lambda-FITC (conjugate) cocktail antibody in transplant renal pathology

本刊推荐：为解决移植肾活检中免疫复合物沉积检测流程繁琐、成本高昂的问题，研究人员开展了针对抗人IgA、IgG、IgM、Kappa、Lambda-FITC鸡尾酒抗体(CTA)联合C3&C1q抗体筛查效用的研究。结果表明，该联合方案对诊断免疫复合物介导的疾病具有100%的敏感性和特异性，为移植肾病理提供了一种高效、经济的筛查新策略。

　　

在肾移植领域，移植肾活检是评估移植肾功能异常的金标准。然而，这块组织样本尤为珍贵，如何在有限的样本中高效、准确地诊断出各种病变，尤其是鉴别是排斥反应、药物毒性，还是原发肾脏疾病的复发或新发，一直是临床病理医生面临的挑战。其中，免疫复合物介导的疾病，如IgA肾病(IgAN)、膜性肾病(MN)、C3肾小球肾炎(C3GN)等，在移植肾中也可能复发或新发，其诊断高度依赖免疫荧光(IF)技术。传统的IF检测面板需要分别检测免疫球蛋白重链（IgG, IgA, IgM）、轻链（Kappa, Lambda）以及补体蛋白（C3, C1q），操作步骤繁琐，试剂消耗量大，对于宝贵的移植肾活检组织而言，无疑增加了成本和诊断时间。那么，有没有一种更高效、更经济的筛查方法呢？

为了回答这个问题，发表在《Surgical and Experimental Pathology》上的这项研究，创新性地评估了一种多价抗体鸡尾酒试剂——兔抗人多克隆IgA, IgG, IgM, Kappa, Lambda-FITC抗体鸡尾酒(CTA)——在移植肾活检中识别免疫复合物沉积的效用。研究人员提出，将CTA与补体C3和C1q抗体联合使用，作为一种初筛方案，有望简化流程，节省宝贵样本和检测成本。

本研究为一项前瞻性研究，纳入了2019年4月1日至2020年3月31日期间在NextGenPath Diagnostics接收的所有连续移植肾活检样本，共计154例。研究的关键技术方法包括：对活检组织进行常规光镜(LM)检查（H&E、PAS、JMS、MT染色）和免疫荧光(IF)检测。IF面板除了包含常规的单个免疫球蛋白和补体抗体外，额外加入了CTA。由三位病理学家独立审阅IF染色结果（强度≥2+视为阳性）和LM findings，共同做出诊断。

研究结果

免疫复合物介导疾病的检出情况

在154例移植肾活检中，有16例（10.3%）通过IF检测发现了免疫复合物沉积，诊断为免疫复合物介导的肾脏疾病。这16例的具体构成如下：13例为IgA肾病(IgAN)，2例为IgA优势的感染后肾小球肾炎(IgA-PIGN)，1例为C3肾小球肾炎(C3GN)。其余138例（89.7%）未发现免疫球蛋白或补体沉积。

CTA的染色模式与诊断一致性

研究发现，CTA的阳性染色模式与疾病类型高度吻合。在13例IgAN患者中，CTA均显示为系膜区的颗粒状沉积，这与IgA肾病典型的系膜区免疫复合物沉积特征一致。值得注意的是，有9例IgAN患者同时伴有C3的共沉积。在2例IgA-PIGN中，CTA呈现出上皮下“ lumpy-bumpy”的沉积模式，符合该病的病理特点。而那1例C3GN患者，CTA检测结果为阴性，但C3补体染色为阳性，这与C3GN仅涉及补体旁路活化、通常不伴有免疫球蛋白沉积的病理机制相符。所有病例的IF和LM诊断均由三位病理学家达成完全一致。

CTA联合C3&C1q的诊断效能

研究结果显示，CTA在全部15例存在免疫球蛋白沉积的疾病（13例IgAN和2例IgA-PIGN）中均为阳性，而在C3GN和其余138例无免疫复合物沉积的病例中均为阴性。由于筛查方案是CTA与C3和C1q联合使用，C3补体在唯一的C3GN病例中显示了阳性。基于此，本研究计算出，在诊断免疫复合物介导疾病时，CTA联合C3和C1q方案的特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值均达到了100%。

讨论与结论

本研究首次在移植肾活检中系统评估了CTA作为免疫荧光初筛工具的价值。其结果与研究者前期在原生肾活检中的发现高度一致，再次证实了CTA的高效性和可靠性。CTA作为一种筛查工具，兼具高敏感性和高特异性。其敏感性体现在能准确检出所有存在免疫球蛋白沉积的疾病（如IgAN, IgA-PIGN），其特异性体现在对无免疫球蛋白沉积的疾病（如C3GN）呈阴性，而后者可通过同时检测的C3补体得以识别。这凸显了将CTA与C3和C1q联合使用的必要性，二者相辅相成，共同构成一个完整的筛查体系。

更重要的是，该方案具有显著的成本效益优势。传统的完整IF面板（IgG, IgA, IgM, Kappa, Lambda, C1q, C3）成本记为“7X”。而采用CTA（包含IgG, IgA, IgM, Kappa, Lambda）+ C3 + C1q的初筛方案后，如果初筛阳性且LM提示特定疾病（如系膜沉积提示IgAN），则可仅加做相应的单一抗体（如IgA）进行确认，避免了其他4种免疫球蛋白和轻链抗体的使用，节省了“4X”的成本。若初筛完全阴性，则可直接省去所有5种免疫球蛋白和轻链的检测，节省“5X”的成本。这对于医疗资源优化和减轻患者经济负担具有重要意义。

基于以上发现，研究者提出了一项适用于常规肾病理实践的优化流程建议：首先使用CTA联合C3和C1q进行免疫荧光初筛，然后根据初筛结果和光镜所见，有针对性地追加必要的单一抗体检测，从而实现精准诊断与资源节约的平衡。

综上所述，本研究有力地证明了抗人IgA, IgG, IgM, Kappa, Lambda-FITC鸡尾酒抗体(CTA)与补体C1q和C3联合使用，是移植肾活检中检测免疫复合物沉积的一种高度敏感、特异、经济且高效的筛查工具。这一创新性策略为宝贵的移植肾活检组织的病理学评估提供了新思路，有望在临床实践中推广，提升诊断效率并优化资源利用。研究的局限性在于未能包含其他可复发的疾病类型（如膜性肾病）以及缺乏电子显微镜(EM)的验证数据，未来研究可进一步拓展验证其更广泛的应用价值。