通过液相色谱-串联质谱法对N-((2-异丙基噻唑-4-基)甲基)-N-甲基亚硝胺进行痕量级定量

《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》：Trace-Level Quantitation of N-((2-isopropylthiazol-4-yl)methyl)- N-methylnitrous amide by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

NITMA的LC-MS/MS检测方法开发及验证，用于利托那韦制剂中痕量硝基胺的定量，灵敏度达0.0225 ng/mL，并评估了ITMA在加速条件下的硝基化反应及假阳性抑制策略。

　　近年来，硝基胺类化合物因其具有强效的致突变和致癌特性而引起了广泛的关注。这类化合物在制药领域尤其重要，因为它们可能作为药物杂质存在于最终产品中，从而对患者的健康构成潜在威胁。为了确保药物的安全性和质量，监管机构如美国食品药品监督管理局（FDA）和欧洲药品管理局（EMA）对硝基胺类杂质设定了严格的可接受摄入量（AI）标准。例如，FDA和EMA分别推荐了NITMA（一种与药物物质相关的硝基胺杂质）的AI为26 ng/day和18 ng/day。因此，开发一种高灵敏度、高选择性的定量方法对于确保药物产品的合规性至关重要。

在本研究中，科学家们开发并验证了一种基于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的分析方法，用于检测和定量ritonavir药物物质及其制剂混合物中的NITMA。该方法采用正离子模式下的电喷雾电离（APCI）技术，并通过多反应监测（MRM）对NITMA进行定量分析。研究团队还特别关注了在样品制备和分析过程中可能发生的NITMA人工形成问题，通过在加速条件下研究其前体ITMA的硝化反应，以优化实验条件并减少干扰。

为了确保方法的适用性和可靠性，研究团队对多个关键参数进行了详细评估，包括线性、准确度、精密度、定量限（QL）、检测限（DL）、溶液稳定性以及方法的鲁棒性。通过采用不同浓度的标准溶液进行测试，他们发现该方法在0.0225 ng/mL至0.27 ng/mL的广泛浓度范围内表现良好，并且符合ICH Q2(R2)指南的要求。此外，通过使用氘代的NITMA作为内标物，研究团队进一步提高了方法的选择性和灵敏度。

实验结果表明，该方法能够有效地检测和定量NITMA，即使在含有高浓度活性药物成分（API）、杂质、降解产物和辅料的复杂样品中也能保持良好的选择性。通过调整实验条件，如使用特定的溶剂混合物（80%甲醇/20%水，含3%氨水），研究团队成功地防止了样品制备和分析过程中可能发生的NITMA人工形成，从而避免了假阳性的出现。此外，通过研究NITMA的E/Z异构体，他们发现这些异构体在不同温度条件下保持稳定的比值，这有助于确保定量结果的准确性。

在方法验证过程中，研究团队评估了多个参数，包括准确性、精密度和范围。通过多次重复实验和不同浓度水平的测试，他们确认了该方法的高准确度和精密度，其回收率在80%至120%之间，RSD值在3%以内。这些结果表明，该方法不仅适用于ritonavir药物物质，还适用于含有ritonavir的制剂混合物，展示了其广泛的应用潜力。

最终，该方法被成功应用于四种市售ritonavir标准品和相应的制剂混合物的检测。测试结果显示，NITMA的含量在不同标准品中存在显著差异，但所有测试结果均符合AI要求，且与相应标准品的含量一致，证明了该方法的高度特异性和可重复性。研究团队还强调了该方法在质量控制（QC）实验室中的应用价值，包括批次放行测试和稳定性研究，以支持风险评估策略和监管合规。

总的来说，这项研究不仅开发了一种高效、灵敏的分析方法，还通过系统的方法优化和验证，确保了其在实际应用中的可靠性和实用性。这一成果对于制药行业在确保药物安全性和质量方面具有重要意义，同时也为其他硝基胺类杂质的检测提供了参考。