来自衢州的枳实（Fructus Aurantii）通过调节肝脏巨噬细胞中依赖于糖酵解的M1极化作用，改善了代谢性脂肪性肝病（MASLD）

《Phytomedicine》：Quzhou-sourced Fructus Aurantii ameliorates MASLD by modulating glycolysis-dependent M1 polarization in hepatic macrophages

通过对比研究，Fructus Aurantii（Quzhou-origin）显著改善代谢功能障碍相关脂肪肝病（MASLD）的肝炎症和纤维化，其机制涉及抑制巨噬细胞PKLR介导的糖酵解通量，逆转M1极化，同时通过调节肠道屏障功能间接发挥作用。与FDA批准药物resmetirom相比，FAQ在高剂量下更有效改善代谢紊乱，但抗炎和抗纤维化效果略逊。

　　Fructus Aurantii（简称FAQ）是一种源自中国浙江衢州的地道中药材，主要来源于未成熟的柑橘类植物果皮。近年来，随着对代谢相关脂肪性肝病（Metabolic Dysfunction-Associated Steatotic Liver Disease, MASLD）研究的深入，FAQ因其在改善肝脏功能、调节代谢紊乱方面的潜力而受到广泛关注。MASLD作为全球最常见的慢性肝病之一，其发病率持续上升，尤其是在年轻和儿童群体中尤为显著。该疾病不仅会导致脂肪肝，还可能进一步发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌（HCC），并增加心血管疾病、慢性肾病和某些非肝部恶性肿瘤的风险。因此，探索有效的治疗手段和深入理解其作用机制对于MASLD的防控具有重要意义。

本研究旨在通过与首个获批用于治疗代谢相关脂肪性肝炎（MASH）的药物Resmetirom进行对比，评估FAQ在MASLD治疗中的疗效，并揭示其作用机制。研究团队采用了一系列先进的实验方法，包括组织病理学分析（如H&E染色、油红O染色、Sirius Red染色和Masson染色）、超微结构分析（透射电子显微镜，TEM）以及血清学检测（如血糖、血脂、ALT/AST水平），从而全面评估FAQ对MASLD相关代谢异常、肝脏炎症和纤维化的保护作用。此外，研究还通过整合转录组学分析和单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术，揭示了FAQ通过抑制肝脏巨噬细胞中PKLR（Pyruvate Kinase L/R）介导的糖酵解过程，进而减少M1型巨噬细胞的极化，从而减轻肝脏炎症和纤维化的潜在机制。这一发现不仅为FAQ的临床应用提供了科学依据，也为开发针对MASLD的新疗法提供了新的思路。

MASLD的核心病理特征之一是肝脏巨噬细胞向促炎性M1表型的过度极化。M1型巨噬细胞会分泌大量促炎性细胞因子，如干扰素α（IFN-α）和白细胞介素6（IL-6），这些因子不仅加剧肝脏炎症反应，还可能进一步激活肝星状细胞（Hepatic Stellate Cells, HSCs），促进细胞外基质（Extracellular Matrix, ECM）的沉积，从而导致肝纤维化。因此，调控巨噬细胞的极化状态成为MASLD治疗的重要方向。目前，已有多种药物被用于干预这一过程，例如17β-羟基类固醇脱氢酶7抑制剂（fenretinide）通过抑制M1极化减轻肝脏脂肪堆积，SGLT2抑制剂则通过促进巨噬细胞从M1向M2表型的转化，改善肝脏脂肪变性和纤维化。此外，中药制剂如“逐瘀丸”通过调节TLR4信号通路，抑制M1极化，从而在MASLD小鼠模型中展现出良好的治疗效果。

FAQ作为一种兼具药用和食用价值的传统中药，其成分复杂，含有多种生物活性物质，其中黄酮类化合物是主要的有效成分。之前的研究表明，FAQ中的黄酮类成分能够有效抑制氧化应激，减轻MASLD相关的肝脏炎症反应。此外，FAQ还能恢复肠道屏障功能，减少脂多糖（LPS）向肝脏的转移，从而间接抑制LPS引发的M1巨噬细胞极化，缓解MASLD引起的炎症和纤维化。然而，尽管FAQ在MASLD治疗中表现出良好的潜力，其直接作用机制仍需进一步明确。为此，本研究通过与Resmetirom的直接比较，不仅验证了FAQ的治疗效果，还深入探讨了其在肝脏疾病中的作用路径。

Resmetirom是一种新型的药物，其作用机制主要针对肝脏中的脂滴代谢，能够有效减少脂肪肝的发生并抑制肝纤维化。在本研究中，Resmetirom在抗炎和抗纤维化方面表现出优于FAQ的效果，这可能与其直接调控肝脏代谢途径有关。然而，FAQ在高剂量下能够显著改善肝脏脂肪变性，并有效调节代谢紊乱，这提示FAQ可能在治疗MASLD的某些方面具有独特的优势。通过比较两者的疗效，研究团队发现，FAQ的治疗作用主要体现在抑制肝脏巨噬细胞的糖酵解过程和M1极化，而Resmetirom则更侧重于改善肝脏代谢功能。这一发现不仅为FAQ的临床应用提供了理论支持，也为开发新的MASLD治疗策略提供了参考。

在机制研究方面，本研究通过整合转录组学和单细胞RNA测序技术，揭示了FAQ如何通过调控PKLR表达来抑制肝脏巨噬细胞的糖酵解过程。PKLR是一种关键的糖酵解酶，其在巨噬细胞中的表达水平与M1极化的程度密切相关。当PKLR被激活时，会促进糖酵解途径的进行，从而为M1极化提供能量支持。这一过程会进一步导致促炎性细胞因子的分泌，激活HSCs，促进纤维化进程。研究结果表明，FAQ能够剂量依赖性地逆转PKLR驱动的糖酵解过程，减少M1型巨噬细胞的极化，从而降低促炎性细胞因子的分泌，抑制HSCs的激活，最终缓解MASLD引起的肝脏炎症和纤维化。这一机制的发现，不仅深化了对FAQ治疗作用的理解，也为进一步探索其在MASLD治疗中的应用提供了新的视角。

此外，研究团队还通过PKLR过表达和挽救实验，进一步验证了PKLR在FAQ治疗MASLD中的关键作用。实验结果显示，当PKLR被过表达时，FAQ的治疗效果被显著削弱，这表明PKLR是FAQ发挥抗MASLD作用的重要靶点。这一结果与之前的研究一致，即PKLR在巨噬细胞的糖酵解和炎症反应中起着核心作用。因此，FAQ通过抑制PKLR的表达，不仅能够阻断糖酵解途径，还能有效调控巨噬细胞的极化状态，从而发挥其抗炎和抗纤维化的双重作用。

在研究过程中，团队还采用了多种实验模型，包括MASLD小鼠模型和人源性巨噬细胞与HSCs的共培养系统，以确保研究结果的可靠性。这些实验模型能够模拟MASLD的病理过程，并为药物作用机制的研究提供直观的证据。通过这些实验，研究团队不仅验证了FAQ的治疗效果，还明确了其作用的分子靶点和信号通路。这些发现对于理解FAQ在MASLD中的作用机制具有重要意义，并为未来药物研发提供了新的方向。

本研究的结论表明，FAQ通过调控肝脏巨噬细胞的PKLR表达和糖酵解过程，有效抑制了M1型巨噬细胞的极化，从而减轻了MASLD相关的肝脏炎症和纤维化。这一机制的发现，不仅拓展了我们对FAQ治疗作用的理解，也为开发新的MASLD治疗药物提供了理论依据。此外，研究还强调了FAQ在改善代谢紊乱方面的潜力，这可能与其多种生物活性成分的协同作用有关。未来的研究可以进一步探讨FAQ与其他药物的联合使用效果，以及其在不同MASLD阶段的治疗价值。

研究的开展离不开团队成员的共同努力。Junbin Yan和Yunmeng Nie作为主要研究者，负责实验设计、实施和论文撰写；Menglu Ding、Mi Zhou和Tingyuan Li则专注于临床数据的收集和分析；Sumei Xu在临床研究方面提供了指导，并参与了论文的修改和润色；Shuo Zhang则负责整个项目的规划和管理。所有数据均来源于团队内部实验，确保了研究的独立性和真实性。所有作者均对研究的各个方面负责，并承诺保证研究的完整性与准确性。

在伦理方面，本研究严格遵守动物实验的伦理规范，所有实验均按照美国国立卫生研究院（NIH）的《实验室动物护理与使用指南》进行，并获得了浙江中医药大学实验动物管理与伦理委员会的批准（申请编号：202308-0663；批准编号：IACUC-20230904-10）。临床研究部分则获得了传统中医医院伦理委员会的批准，确保了研究的合法性和伦理性。此外，研究团队还声明未使用任何生成式人工智能工具进行论文撰写，所有内容均为团队成员自主完成，并经过严格的验证和校对，以确保数据的真实性和论文的科学性。

综上所述，本研究通过与Resmetirom的对比，不仅验证了FAQ在MASLD治疗中的有效性，还揭示了其通过抑制肝脏巨噬细胞PKLR介导的糖酵解过程和M1极化，从而减轻肝脏炎症和纤维化的机制。这一发现为FAQ的临床应用提供了坚实的科学基础，并为MASLD的治疗策略提供了新的方向。未来，随着对FAQ作用机制的进一步研究，有望开发出更多基于其成分的药物，为MASLD患者提供更安全、有效的治疗选择。