《Atlas of the Oral and Maxillofacial Surgery Clinics》：Trial for developing a reference extract for future standardization of Japanese cypress pollen extracts
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日本 cedar/cypress 花粉症（JCCP）患者常因日本雪松花粉（JCyP）过敏加重症状，本研究通过甘油提取法制备JCyP参考提取物（Lot AA），检测其蛋白（4.7 mg/mL）及主要过敏原（Cha o 1:18.8 μg/mL）浓度，并测试55例血清IgE阳性患者的皮肤试验阈值，平均为3^6.4稀释度，证实其安全性和有效性，为JCyP标准化抗原及免疫疗法开发奠定基础。
Kengo Kanai|Aiko Oka|Hideaki Kouzaki|Kento Kawakita|Takuya Murao|Takeshi Shimizu|Takaya Higaki|Aya Murai|Mizuo Ando|Kojiro Hirano|Isao Suzaki|Hitome Kobayashi|Minoru Gotoh|Kimihiro Okubo|Mitsuhiro Okano
日本成田国际健康福利大学医学院耳鼻喉科
摘要
目的
日本雪松花粉症（JCP）是日本最常见的季节性过敏性鼻炎。许多JCP患者同时对日本柏树花粉（JCyP）也具有敏感性，在JCyP传播期间，他们的症状会加重并持续更长时间。迄今为止，尚未有关于开发针对JCyP的特异性过敏原免疫疗法的报道。为了未来开发JCyP特异性皮肤测试和免疫疗法，我们试图制备一种参考提取物，以用于标准化JCyP提取物，该提取物通过皮内皮肤测试中引发阳性反应的平均阈值稀释度来确定。
方法
采用甘油提取法从JCyP颗粒中制备了1:20的抗原提取物（批号AA）。测定了提取物中的蛋白质和过敏原浓度。确认其安全性后，从批号AA中制备了3倍系列稀释的JCyP提取物。根据ImmunoCAP IgE检测或View39 IgE检测结果，选取血清中JCyP特异性IgE类别为2或更高的日本受试者，确定在皮内皮肤测试中引发阳性反应的平均阈值稀释度。
结果
批号AA中的蛋白质浓度为4.7 mg/mL，Cha o 1的过敏原浓度为18.8 μg/mL，Cha o 3的过敏原浓度为1.1 μg/mL。共有85名受试者注册参加了这项研究，最终有55名受试者参与了数据分析。在32名受试者中，皮内反应的阈值稀释度为3^6（58.2%）；8名受试者为3^7（14.6%）；4名受试者为3^8（7.3%）；1名受试者为3^9（1.8%）；10名受试者无反应（18.2%）。平均阈值稀释度为3^6.4，相当于1131倍稀释。在所有测试的稀释度下均未观察到严重的不良反应。
结论
结果表明，JCyP提取物批号AA具有体内过敏活性且安全。因此，它可能作为未来JCyP的标准抗原或其他JCyP提取物的参考抗原，用于JCyP花粉症的诊断和治疗。
引言
日本雪松花粉症（JCP）影响了大约40%的日本人口，是一种全国性的疾病[1]。许多JCP患者同时对日本柏树花粉（JCyP）也具有敏感性，这导致在JCyP传播期间症状加重并持续更长时间；因此，最近采用“日本雪松/柏树花粉症”（JCCP）这一术语来统称这两种类型的过敏[2]。JCCP可引起过度鼻部症状，如打喷嚏和流鼻涕，严重影响患者的生活质量、工作效率以及集中注意力和学习的能力。此外，由于鼻塞导致的口呼吸会导致呼吸道黏膜干燥，增加患者感染病毒的风险[[3],[4],[5]]。因此，迫切需要开发能够缓解这些症状加重的治疗方法。
目前，JCyP过敏的治疗主要采用对症治疗，如抗过敏药物。虽然使用日本雪松花粉抗原的过敏原免疫疗法对JCP有效，但据报道在JCyP传播季节某些患者的疗效较差[2]。迄今为止，尚未有关于开发针对JCyP的特异性过敏原免疫疗法的报道。
开发过敏原免疫疗法的第一步是制备具有明确过敏活性的标准化抗原。需要使用标准化抗原来确认和/或监测体内皮肤测试的反应。目前，尚无具有明确生理活性浓度的JCyP标准化抗原。因此，我们尝试使用与日本雪松和尘螨标准化抗原类似的程序来制备JCyP提取物的参考提取物[6,7]。
部分内容摘录
JCyP提取物的制备
使用50%（w/w）纯化甘油、5%（w/w）氯化钠和无菌水，通过甘油提取法从JCyP颗粒中制备了JCyP提取物[7]。JCyP颗粒购自YAMIZO花粉研究所（日本茨城县），JCyP提取物由KNC实验室有限公司（日本兵库县）制备。在提取过程中，我们遵守了所有相关法规，如《药品、医疗器械和其他治疗产品法》等。
JCyP提取物中的蛋白质和主要过敏原浓度
从JCyP颗粒中获得的抗原提取物被命名为批号AA。提取物中的蛋白质浓度为4.7 mg/mL。SDS-PAGE检测显示存在分子量与Cha o 1和Cha o 2相似的蛋白质（图3）。Western blotting证实提取物中存在Cha o 1和Cha o 2（图4）。通过ELISA检测过敏原浓度，发现Cha o 1的浓度为18.8 μg/mL，Cha o 3的浓度为1.1 μg/mL。讨论
先前的报告显示，标准化的日本雪松花粉提取物（批号G）含有Cry j 1，一种属于柏科（Cupressaceae）的1组过敏原，浓度为12.5 μg/mL[7]。本研究中的批号AA含有Cha o 1，这也是一种1组过敏原，浓度为18.8 μg/mL。因此，日本雪松花粉提取物批号G和JCyP提取物批号AA似乎含有相似量的1组过敏原。
在本研究中，我们遵循了JCP提取物标准化过程中建立的皮肤测试滴度测量方法
作者贡献
KengK、AO和MO构思了研究并撰写了初稿。HidK、KentK、TM、TH、AM、KH和IS参与了数据整理。TS、MA、HitK、MG和KO进行了正式分析并验证了结果。
