《Burns》：Characteristics and significance of blister fluid cell-free mitochondrial DNA in pediatric small area intermediate depth burns wound
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儿童小面积中间深度烧伤水疱液中线粒体DNA（mtDNA）的分布特征及其与炎症因子（IL-6、IL-8、TGF-β1）水平及愈合时间的关联性分析。采用PCR法检测mtDNA拷贝数（中位数76.30），发现其与IL-6、IL-8、TGF-β1均呈显著正相关（P<0.05），且高mtDNA水平与延迟愈合并存（P<0.05）。研究证实水疱液mtDNA可作为评估烧伤严重程度的潜在生物标志物。
刘海亮|王书军|李东杰|李大伟|张一杰|李鑫|沈传安
中国人民解放军总医院烧伤与整形外科高级部门，北京100048，中国
摘要
背景
线粒体DNA（mtDNA）在炎症调节中起着关键作用，在细胞应激或创伤性损伤的情况下可能会被动或意外释放。在这项研究中，我们试图评估mtDNA在儿童小面积中度烧伤创面水疱液中的分布及其意义。
方法
该试验是对一项单中心、前瞻性观察性研究的后续分析，纳入了62名患有小面积部分厚度热烧伤的儿童。使用基于PCR的检测方法测量水疱液中的mtDNA含量。通过基于ELISA的检测方法评估了包括白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和转化生长因子β1（TGF-β1）在内的细胞因子水平，并分析了mtDNA与炎症标志物及伤口愈合结果之间的关联。
结果
mtDNA拷贝数（mtDNA-CN）的中位数值（最小值，最大值）为76.30（16.5，219.1）。Spearman等级相关系数分析显示，IL-6、IL-8和TGF-β1的水平与烧伤水疱液样本中的mtDNA-CN均存在显著相关性（所有P<0.05）。此外，观察到水疱液中的mtDNA-CN与伤口愈合时间之间存在显著关联（P<0.05）。Kaplan-Meier曲线通过对数秩检验表明，水疱液中的mtDNA-CN与重新上皮化时间显著相关（P<0.05）。
结论
水疱液中的mtDNA可以作为预测儿童小面积中度烧伤严重程度的潜在指标。
引言
尽管在过去十年中伤口覆盖材料、外科技术和综合预防措施有所进步，烧伤仍然是导致儿童发病率和死亡率的主要意外创伤性损伤[1]，[2]。部分厚度烧伤（也称为二度烧伤）是儿童烧伤急诊科最常见的烧伤类型[3]，[4]。部分厚度烧伤主要影响所有表皮层和部分真皮层，伤口表现为疼痛、湿润和起水疱，可分为浅表部分厚度烧伤和深部部分厚度烧伤[5]。这两种烧伤在初次就诊时的表现可能很相似[6]。此外，大多数部分厚度烧伤同时包含浅表和深层损伤。因此，准确评估和诊断部分厚度烧伤的深度对烧伤外科医生来说是一个挑战。
烧伤深度被认为是与短期（即伤口愈合）和长期预后（疤痕形成和结果）相关的关键因素[7]。众所周知，烧伤损伤可分为三个区域[8]。在损伤后的早期阶段，停滞区域的组织坏死会导致烧伤深度增加，从而使烧伤从浅表部分厚度发展为深部部分厚度[9]。适当的急救和即时急性伤口护理有助于减缓伤口进展，从而改善伤口愈合并降低肥厚性疤痕的风险。
目前，烧伤深度的评估主要基于视觉观察或重新上皮化的时间，但这具有主观性、不准确或不可靠性，无法有效指导治疗[10]，[11]。已经有一些基于血液样本分析的生物标志物被用于预测烧伤深度和由此引起的系统炎症[12]，[13]，[14]。然而，血液中的生物标志物始终反映的是全身状况，而不是烧伤伤口的局部微环境，尤其是对于局部烧伤而言[15]。对于部分厚度烧伤，水疱液可能更适于评估伤口的局部微环境反应。Zang等人对87份来自不同儿童烧伤患者的水疱液样本中的600多种蛋白质进行了定量分析，发现几种蛋白质的丰度与临床评估的烧伤深度和完全伤口重新上皮化时间相关[16]。
线粒体DNA（mtDNA）是线粒体的自身基因组，在炎症和免疫调节中起着重要作用[17]。在细胞应激或创伤性损伤的情况下，mtDNA可能会被动或意外释放[18]。此外，已有研究表明败血症烧伤患者的血浆mtDNA水平显著升高[19]。然而，目前尚无关于局部烧伤创面水疱液中mtDNA水平的数据。因此，在这项研究中，我们评估了儿童局部中度烧伤创面水疱液中的无细胞线粒体DNA，并分析了其临床价值。
研究设计
这项回顾性观察性研究获得了中国人民解放军总医院第四医疗中心的伦理批准。每位入选患者均需签署关于收集水疱液和临床数据的书面知情同意书。此外，本研究遵循了赫尔辛基宣言的原则进行。
患者
共有62名患有小面积部分厚度热烧伤的儿童患者就诊于烧伤与整形外科
患者人口统计学和烧伤特征
如表1所示，共有62名患有小面积部分厚度烧伤的儿童患者被纳入研究，中位年龄为3岁（范围0.8-16岁），其中男性30名，女性32名。所有参与者的烧伤面积中位数为1%TBSA（0.5%，3%）。47名患者为浅表部分厚度烧伤，15名为深部烧伤。大多数烧伤患者（85%）接受了适当的急救处理，只有15名患者接受了不充分的急救。
讨论
无细胞mtDNA作为一种新的生物标志物，在各种疾病和创伤条件下释放后，在炎症发展中起着关键作用[21]，[22]。在这项研究中，我们首次评估了儿童烧伤水疱液中无细胞mtDNA的分布及其意义。我们的发现表明，较低的mtDNA-CN与烧伤伤口的加速重新上皮化显著相关。此外，我们还发现了其他相关因素
结论
在儿童小面积中度烧伤创面中观察到水疱液中的mtDNA水平升高，这不仅与伤口愈合结果显著且独立相关，还与烧伤水疱液中的炎症标志物相关。在门诊伤口护理过程中容易获取的水疱液mtDNA可能成为评估烧伤严重程度的潜在工具。
伦理批准
本研究获得了中国人民解放军总医院第四医疗中心的伦理委员会批准。
利益声明
作者声明他们没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文报告的工作。
作者贡献声明
研究构思和设计：刘海亮、沈传安；数据采集：刘海亮、王书军；分析和数据解释：刘海亮、李东杰、李大伟；手稿起草：刘海亮、李鑫、张一杰；关键修订：沈传安；与手稿一起提交此表格：刘海亮
