一种用于测定人血浆中苏林达克（Sulindac）及其代谢物Su-EP-C的经验证的LC–MS/MS方法，以及该方法在健康志愿者中的药代动力学应用

《ACS Omega》：A Validated LC–MS/MS Method for the Determination of Sulindac and Its Metabolite Su-EP-C in Human Plasma and Their Pharmacokinetic Application in Healthy Volunteers

高效液相色谱-三重四极杆质谱联用方法（LC-MS/MS）用于测定人类EDTA-K2血浆中硫inden及其活性代谢物Su-EP-C，涵盖方法验证（线性范围60-24000 ng/mL，30-12000 ng/mL）、稳定性（-20/-70℃稳定52天）、基质效应及提取回收率评估。药代动力学研究显示硫inden空腹半衰期3.73 h，餐后4.87 h，而Su-EP-C半衰期分别延长至15.46 h和24.26 h。方法通过生物等效性试验验证，支持药物开发与生产优化。

　　在这项研究中，科学家们开发了一种快速、特异性高且灵敏度强的液相色谱-串联质谱（LC–MS/MS）方法，用于测定人体EDTA-K2血浆中舒林酸及其代谢产物Su-EP-C的浓度。该方法通过使用舒林酸-d3和Su-EP-C-d3作为内标物进行充分验证，确保了测定结果的可靠性和准确性。该方法的色谱分离是在Kinetex C18分析柱上完成的，该柱具有特定的孔径、尺寸和颗粒大小，适用于高分辨率和高灵敏度的分析。流动相由0.05%甲酸水（MPA）和0.05%甲酸乙腈（MPB）组成，以确保样品的有效分离。流动相的流速被设定为0.300 mL/min，而进样体积为3 μL。质谱分析则在电喷雾离子化（ESI）正离子模式下进行，采用多反应监测（MRM）模式，以提高检测的特异性和灵敏度。

舒林酸和Su-EP-C的检测线性范围分别为60.00至24,000.00 ng/mL和30.00至12,000.00 ng/mL。在所有浓度水平上，舒林酸的日内和日间准确度偏差在-5.1%至5.0%之间，而日内和日间精密度在3.3%至4.2%之间。Su-EP-C的日内和日间准确度偏差在-3.9%至6.9%之间，日内和日间精密度在4.8%至7.2%之间。在10倍稀释的情况下，舒林酸的偏差为3.5%，精密度为1.5%；Su-EP-C的偏差为2.7%，精密度为4.4%。这表明该方法在检测过程中具有良好的稳定性和重复性。

在临床应用方面，该方法成功应用于舒林酸片剂的空腹和餐后药代动力学研究。研究对象为健康的中国受试者，研究设计包括单中心、随机、开放标签、四周期、两序列、双交叉实验，以确保实验结果的可靠性和有效性。在空腹实验中，受试者需要至少空腹10小时，而在餐后实验中，受试者需在给药前30分钟摄入高脂肪餐。每周期给予200 mg舒林酸片剂，与240 mL水一起服用。研究结果表明，舒林酸的药代动力学参数在空腹和餐后条件下均符合要求，为药物的生物等效性评估提供了重要的数据支持。

在药代动力学分析中，研究人员使用了非房室模型（NCA）来计算药代动力学参数，如最大血药浓度（Cmax）、0至时间（AUC0-t）、0至无穷大（AUC0-∞）、半衰期（t1/2）和清除率（CL）。这些参数能够有效反映药物在体内的暴露情况和代谢特性。研究中还比较了不同实验条件下（如空腹和餐后）的药代动力学参数，发现餐后条件下，药物的吸收时间延长，峰浓度降低，这支持了优化产品标签和剂量方案的可行性。

研究结果表明，舒林酸的半衰期在空腹条件下约为3小时，在餐后条件下约为5小时，而其活性代谢产物的半衰期则显著延长，分别约为15小时和24小时。这解释了为什么舒林酸只需每日服用两次即可维持其治疗效果。药物的总暴露量和毒性风险与舒林酸及其所有活性代谢产物的浓度密切相关。因此，在评估药物的疗效和安全性时，必须综合考虑舒林酸及其活性代谢产物的浓度变化。

此外，该研究还探讨了舒林酸及其代谢产物在不同血浆条件下的稳定性。血浆样品在-20°C和-70°C条件下保存52天，并经历了5次冻融循环，均保持稳定。这一稳定性对于药代动力学研究的持续性和结果的可靠性至关重要。同时，研究还发现，舒林酸及其代谢产物在新鲜全血中的稳定性较高，但需要在冰浴条件下进行处理以避免光照影响。

在药代动力学研究的设计中，研究人员采用了严格的质量控制措施，包括标准曲线的建立、准确度和精密度的评估、基质效应和回收率的测定以及稀释效应的验证。这些步骤确保了实验数据的准确性和可重复性。标准曲线的建立涉及多个浓度水平的样品，并通过软件分析其线性关系，以确保检测范围的覆盖。准确度和精密度的评估通过比较实际浓度与测定浓度之间的偏差和变异系数，确保实验方法的可靠性。基质效应的测定则通过比较样品中分析物和内标物的峰面积与参考溶液的峰面积，以评估基质对检测的影响。

该研究的实验方法在多个方面得到了优化。首先，通过调整流动相的梯度程序，提高了分离效率和检测灵敏度。其次，使用内标物进行定量分析，减少了基质效应的干扰。此外，实验过程中采用的样品处理步骤，如添加甲醇、离心和低温保存，确保了样品的稳定性和检测的准确性。这些优化措施使得该方法能够满足药代动力学研究的高标准要求，并为药物的开发和生产提供了科学依据。

在药代动力学参数的分析中，研究人员使用了SAS 9.4软件进行统计分析，并采用非房室模型（NCA）计算相关参数。NCA模型是一种无需假设的模型独立分析方法，适用于单剂量研究或缺乏详细机制知识的情况。该模型能够提供重要的药代动力学参数，如AUC、Cmax、tmax和t1/2，这些参数对于理解药物的总体暴露和消除特性至关重要。此外，NCA模型的使用使得实验过程更加高效，减少了资源消耗和时间成本，特别是在早期研究阶段或资源有限的情况下。

通过该研究，科学家们不仅开发了一种新的分析方法，还补充了当前用于检测舒林酸及其代谢产物的分析技术。该方法的建立为药物的进一步开发和生产提供了支持，尤其是在优化药物剂型和提高患者依从性方面。此外，该方法的稳定性、准确度和精密度均满足相关标准，使其成为一种可靠的药代动力学研究工具。这些研究结果对于推动舒林酸的商业化生产具有重要意义，并为药物在不同条件下的药代动力学特性提供了重要的科学依据。