利用多属性高通量疏水相互作用色谱技术实时监测抗体-药物结合物的生物偶联反应

《Analytical Chemistry》：Real-Time Bioconjugation Reaction Monitoring of Antibody–Drug Conjugates with Multiattribute High-Throughput Hydrophobic Interaction Chromatography

抗体偶联药物（ADC）的药物-抗体比（DAR）和药物负载分布（DLD）分析采用铵酒石酸高效液相色谱法（HIC），开发了适用于链间和工程半胱氨酸连接ADC的优化平台，并建立10分钟快速多属性HIC过程分析技术（PAT），实时监测DAR、DLD和连接子浓度，揭示连接子溶解速率影响偶联反应动力学的机制，优化工艺使反应时间缩短90%。

　　

疏水相互作用色谱（HIC）是目前测定抗体-药物偶联物（ADCs）中药物与抗体比例（DAR）及药物载量分布（DLD）的黄金标准方法。在本研究中，我们开发了几种基于酒石酸铵的HIC方法，用于全面表征ADCs并监测生物偶联反应。首先，我们证明了酒石酸铵的分离性能与传统硫酸铵相当，同时具有更优异的质谱兼容性。随后，我们建立了优化的HIC方法，用于分析链间及工程化半胱氨酸偶联的ADCs。此外，我们还开发了一种快速的10分钟多属性HIC方法，作为过程分析技术（PAT），用于实时监测生物偶联反应。这种多属性HIC PAT方法能够同时检测复杂反应混合物中的DAR、DLD以及药物连接子（DL）的浓度。通过先进的PAT工具，我们对ADC偶联的动力学机制获得了关键见解。例如，我们发现DL的溶解速率可能限制浆液反应的进行，这一发现是传统技术（如紫外光谱法）无法实现的。这些发现有助于识别关键工艺参数，从而指导有针对性的工艺改进，最终将反应时间缩短了90%，并实现了理想的平均DAR值，同时减少了不必要的过度偶联现象。