基于NanoBRET的生物传感器，用于高通量筛选RAB11A-FIP2相互作用抑制剂

《Analytical Chemistry》：NanoBRET-Based Biosensor for High-Throughput Screening of RAB11A–FIP2 Interaction Inhibitors

1. 开发了基于纳米生物共振能量转移（NanoBRET）的RAB11A激活生物传感器，用于实时检测活细胞中蛋白-蛋白相互作用（PPIs），并成功筛选出3个能抑制RAB11A-FIP2轴的小分子，通过阻断GLUT3转运途径显著降低胶质母细胞瘤细胞葡萄糖摄取，为代谢干预治疗提供新策略。

　　

蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）是细胞过程的关键调节因子，也是极具潜力的治疗靶点。然而，现有的针对PPIs的药物发现方法（如表面等离子体共振技术）存在固有的局限性，例如无法完全模拟细胞内环境。为了解决这些问题，我们开发了一种基于NanoBRET技术的RAB11A激活生物传感器，该传感器利用生物发光共振能量转移（BRET）技术在活细胞中检测PPIs，同时保持蛋白质的天然功能。利用这一平台，我们筛选了7040种小分子，发现了一些能够显著干扰RAB11A与其效应蛋白结合的抑制剂（表现为BRET比值的降低）。RAB11A是调控内体循环的关键因子，尤其是在葡萄糖转运蛋白（GLUT）的运输过程中起重要作用，因此成为代谢干预的理想靶点。由于RAB11家族相互作用蛋白2（FIP2）与RAB11A的结合对其激活至关重要，破坏这一相互作用会阻碍GLUT3的运输，从而降低葡萄糖的摄取——而葡萄糖摄取是驱动胶质母细胞瘤进展的关键代谢过程。研究发现，抑制RAB11A-FIP2轴可减弱GLUT3的运输，进而影响胶质母细胞瘤的葡萄糖代谢。在筛选出的小分子中，有三种候选分子被进一步证实能够同时干扰RAB11A的激活和GLUT3的运输，这表明它们具有作为代谢调节因子的潜力。我们基于NanoBRET技术的生物传感器为高通量筛选PPI抑制剂提供了一个稳健且可扩展的平台，为开发针对PPIs的新疗法提供了有力策略。