脱氢表雄酮通过NFκB/IL-10/Sirt1/Nrf2介导的途径抑制老年大鼠的心脏衰老

《Experimental Gerontology》：Dehydroepiandrosterone opposes cardiac aging via NFκB/IL-10/Sirt1/Nrf2 mediated pathway in aged rats

阿尔茨海默病（AD）相关视网膜神经血管单元（NVU）功能障碍研究中，使用5xFAD小鼠模型，发现孟鲁司特（CysLTR1拮抗剂）治疗增加了AD小鼠视网膜毛细血管周细胞（PC）覆盖率，但对毛细血管直径、小胶质细胞数量、星形胶质细胞面积及视网膜神经节细胞密度无显著影响。

　　阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD）是一种复杂的神经退行性疾病，影响大脑和视网膜。近年来，研究发现AD在大脑中的病理特征，如神经炎症、血管变化和β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积等，也在视网膜中有所体现。视网膜作为中枢神经系统（CNS）的一部分，具有与大脑相似的结构和功能，因此成为研究AD病理变化的重要窗口。本研究旨在探讨CysLTR1受体拮抗剂蒙特鲁卡斯（Montelukast, MTK）对5xFAD小鼠模型中视网膜神经血管单元（Neurovascular Unit, NVU）细胞的影响，以期揭示其对AD相关血管和神经异常的潜在治疗作用。

### 研究背景

AD的病理特征包括Aβ斑块沉积、tau蛋白异常磷酸化、神经炎症和血管病变。其中，血管变化被认为是AD发展和恶化的重要因素之一。NVU是由神经元、胶质细胞（包括星形胶质细胞和小胶质细胞）以及血管细胞（如毛细血管周细胞[Pericytes, PCs]、血管平滑肌细胞和内皮细胞）组成的高度协调的结构和功能单元，能够调节血流、维持神经元代谢活动以及保持血脑屏障（BBB）和视网膜血屏障（BRB）的完整性。在AD中，NVU的破坏和功能障碍常伴随炎症反应、血管渗漏和血流减少等现象。

此外，白三烯（Leukotrienes, LTs）作为脂质介质，参与炎症反应和血管调节，其信号通路在AD病理过程中具有重要作用。特别是CysLTR1受体，被认为在AD相关炎症和血管病变中发挥关键作用。已有研究表明，抑制LT合成或阻断CysLTR1受体可能对AD病理产生有益影响，如减少Aβ斑块负荷和改善认知功能。因此，本研究选择在5xFAD小鼠模型中，分析MTK对视网膜NVU细胞的影响，特别是对PC覆盖、毛细血管直径、小胶质细胞密度、星形胶质细胞活动和视网膜神经节细胞（Retinal Ganglion Cells, RGCs）密度等参数的影响。

### 研究方法

本研究使用了44只5xFAD转基因小鼠，这些小鼠在8个月大时被分为实验组和对照组。实验组小鼠接受了13周的MTK治疗，分别给予低剂量（3.3 mg/kg）和高剂量（10 mg/kg），而对照组则接受载体处理。同时，使用同龄的野生型（WT）C57Bl/6J小鼠作为对照，以评估5xFAD突变对视网膜结构和功能的影响。所有小鼠在最后一次行为测试后被处死，取出眼球并进行固定处理，随后通过免疫荧光（Immunofluorescence, IF）技术分析视网膜组织。

在免疫荧光分析中，研究人员使用了多种抗体，包括针对NG2（用于标记PCs）、ColIV（标记血管基底膜）、Iba1（标记小胶质细胞）、GFAP（标记星形胶质细胞）和Brn3a（标记RGCs）的抗体。通过显微镜观察和图像分析软件（如ImageJ）对这些标记物进行定量分析，以评估视网膜中NVU细胞的分布和功能变化。研究还分析了毛细血管分支数量、毛细血管连接点数量和平均分支长度等参数，以进一步了解MTK对视网膜血管结构的影响。

### 研究结果

研究结果显示，5xFAD小鼠的视网膜中，PC覆盖在中央和中间区域未见显著变化，但在外周区域，MTK治疗显著增加了PC覆盖。尽管AD导致毛细血管直径的减少，但这种变化并未受到MTK的影响。小胶质细胞密度在AD小鼠中显著增加，无论是否接受MTK治疗，其数量均未发生变化。此外，星形胶质细胞面积和RGC密度在AD和MTK治疗组中均未出现明显变化。

这些发现表明，在5xFAD小鼠模型中，AD主要影响了视网膜血管的直径和PC的分布，而对小胶质细胞密度、星形胶质细胞活动和RGC密度没有显著影响。值得注意的是，MTK对PC覆盖的影响可能与其对血管屏障的稳定作用有关，这为AD治疗提供了新的思路。然而，由于研究仅使用了免疫荧光技术，无法进一步评估MTK对血管屏障功能的具体影响，因此需要更多的功能研究来验证这一假设。

### 研究意义与展望

本研究揭示了AD在视网膜中的一些微小变化，特别是对PC覆盖和毛细血管直径的影响。尽管MTK对某些参数（如PC覆盖）产生了积极影响，但其对AD相关病理变化的总体影响仍需进一步研究。此外，研究还发现，MTK对小胶质细胞密度和星形胶质细胞活动没有显著影响，这与之前在AD脑组织中的研究结果有所不同。因此，未来的研究应进一步探讨MTK对小胶质细胞亚型分布的影响，以及其在不同年龄和性别中的作用差异。

研究还指出，视网膜作为AD研究的潜在窗口，其结构和功能变化可能比大脑更早出现，这使得视网膜成为非侵入性研究AD病理的有用工具。然而，目前对视网膜中PC密度的研究仍存在一定的局限性，特别是在不同年龄和性别中的变化尚未完全明确。因此，未来的研究应包括更多年龄较大的5xFAD小鼠，并结合更多的分析方法，如Western blot，以更全面地评估CysLTR1在AD视网膜中的表达和功能。

总之，本研究为理解AD在视网膜中的病理变化及其潜在治疗策略提供了重要的数据支持。虽然MTK在某些方面显示出有益效果，但其对AD整体病理的影响仍需进一步探索。通过深入研究视网膜NVU细胞的变化，科学家们或许能够找到更有效的AD治疗靶点，为临床治疗提供新的方向。