内皮蛋白C受体CD201比SCA1更能有效识别小鼠在感染后长期重建的造血干细胞

《Experimental Hematology》：Endothelial protein C receptor CD201 is a better marker than SCA1 to identify mouse long-term reconstituting hematopoietic stem cells following septic challenge

造血干细胞分群分析中SCA1标记易受LPS干扰导致误判，CD201标记在感染后表达稳定且长期移植能力更强，其作用机制与MY88、TRIF信号通路相关。

　　

Kavita Bisht | Valérie Barbier | Svetlana Shatunova | Ingrid G. Winkler | Jean-Pierre Lévesque

昆士兰大学Mater研究所，澳大利亚昆士兰州Woolloongabba

摘要

干细胞抗原-1（SCA1）被广泛用于在谱系阴性KIT⁺（LK）细胞中识别小鼠造血干细胞（HSC）和多能前体细胞（MPP）。然而，SCA1仅在一些近交小鼠品系中表达，并且在体内受到干扰素、脂多糖（LPS）或病原体刺激后，LK细胞上的SCA1表达会显著上调，这导致对HSC功能亚群以及HSC、MPP和谱系限制性前体亚群的划分出现错误。内皮蛋白C受体CD201可以作为小鼠甚至人类HSC的替代标记物。但是，目前尚不清楚感染刺激后CD201的表达是否会发生变化。与SCA1不同，CD201在小鼠LK细胞中对LPS的反应并未发生改变。长期竞争性移植实验表明，无论是CD201⁺、CD201^-还是SCA1⁺的LK细胞，大多数重新形成的HSC都属于LK CD201⁺群体。然而，来自LPS处理小鼠的LK SCA1⁺细胞的长期竞争性再生能力明显低于来自相同LPS处理供体的LK CD201⁺细胞，这表明受刺激供体中的LK SCA1⁺群体可能被缺乏长期再生能力的CD201^-前体细胞污染。基于CD201的筛选策略，我们重新评估了LPS对HSC和MPP周期及迁移的影响，以及它们对MY88和TRIF适配器的依赖性。总之，CD201有助于更准确地分析所有近交品系中小鼠HSC和MPP亚群在感染状态或稳态下的情况。

部分摘录

引言

SCA1（Ly6A/E）抗原已被用于三十多年，用于在谱系阴性（Lin^-）KIT/CD117⁺细胞中识别可移植的小鼠造血干细胞（HSC）和多能前体细胞（MPP）[1,2]。然而，SCA1抗原存在两个主要问题。首先，尽管它在Ly6A.2单倍型的近交小鼠品系（如AKR、C57BL、DBA和S JL）中可用于识别HSC，但在Ly6A.1单倍型的品系（如BALB/c、C3H、CB）中，HSC和MPP的SCA1表达较低[3]。

小鼠

C57BL/6、B6.SJL CD45.1⁺和BALB/c小鼠从澳大利亚西部的Animal Resource Centre或Ozgene购买；B6.SJL小鼠则从Ozgene或澳大利亚新南威尔士州的Australian Bio Resources购买。Myd88^tm1Aki（Myd88^?/?）[21]小鼠由昆士兰大学Frazer研究所的Antje Blumenthal博士提供，Ticam1^tm1Aki（Ticam1^-/-）[22]小鼠由QIMR Berghofer医学研究所的Mark Smyth教授提供。所有品系都经过了10代的回交

LPS在体内显著上调小鼠HSPC上的SCA1抗原表达，但对CD201的影响较小

为了评估败血症对SCA1和CD201表达的影响，小鼠每天接受2.5 mg/kg的LPS注射，连续两天（图1A）。LPS显著增加了血液中的炎症细胞因子，包括1/2型干扰素（补充图1），这些细胞因子已被报道能够上调BM Lin^-细胞上的SCA1表达[6, 7, 8, 9]。

LPS处理使SCA1的荧光强度和SCA1阳性细胞的频率分别增加了约3倍和约2.5倍

讨论

在败血症模型中，我们发现与SCA1不同，CD201在体内受到LPS处理后并未在HSPC中显著上调（图1、图2、补充图4）。我们发现，在稳态或LPS处理后，大多数长期再生活性都集中在LK201⁺群体中，并且LPS处理后的再生活性在分选的LK201⁺细胞中比LKS⁺细胞高4倍（图3、图4）。相比之下，