从印度北部一家三级护理医院分离出的耐磷霉素粪肠球菌的分子特征分析

《Indian Journal of Medical Microbiology》：Molecular characterisation of fosfomycin resistant Enterococci faecalis isolated from a tertiary care medical hospital in northern India.

评估粪肠球菌大环内酯类耐药性及分子机制研究。274株粪肠球菌中20.8%对大环内酯类耐药，73.7%携带fosB基因，与25.2%万古霉素耐药性共存，多见于>39岁及门诊患者。首次揭示本地区粪肠球菌大环内酯类耐药特征及基因关联性。

　　

安朱姆·阿拉·米尔 | 萨伊姆·瓦尼 | 纳尔吉斯·巴利 | 比斯玛·阿哈德 | 马苏玛·肖卡特 | 阿里法·巴希尔

克什米尔医学科学研究所微生物学系，索拉

摘要

目的

评估磷霉素在粪肠球菌尿路分离株中的体外活性，并探讨对该抗生素产生耐药性的分子机制。

方法

从尿样中分离出的粪肠球菌被检测是否含有编码FOS修饰酶的基因：fosA、fosB、fosC、fosX和murA。使用QIAamp DNA Mini试剂盒提取DNA。针对这五个基因进行常规PCR扩增，扩增产物通过凝胶电泳并在凝胶记录系统中可视化。抗菌敏感性测试采用纸片扩散法进行。

结果

本研究共分析了274株粪肠球菌分离株，其中57株（20.8%）对FOS具有耐药性。女性患者（30株，52.6%）和39岁以上患者中检测出更多耐药菌株。大多数耐药菌株来自门诊患者。69株（25.2%）粪肠球菌对万古霉素也具有耐药性。fosB基因在42株（73.7%）分离株中存在，murA基因在15株（26.3%）分离株中存在。此外，所有耐FOS和万古霉素的分离株均携带fosB基因（n=26）。

结论

据我们所知，这是首次在该地区研究粪肠球菌的FOS耐药性。与以往报道相比，FOS耐药性的增加要求严格实施感染控制措施并加强监测研究。

引言

磷霉素（FOS）是一种磷酸酯衍生物，1969年从多种土壤中的链霉菌和假单胞菌中分离得到[1]。这种抗菌剂的结构包含一个对其生物活性至关重要的环氧基团和一个磷酸酯结构。FOS通过抑制UDP-N-乙酰葡萄糖胺烯醇丙酮酸转移酶（murA）来干扰肽聚糖合成的早期阶段，该酶催化肽聚糖前体N-乙酰氨基葡糖酸的形成[1]。FOS广泛用于治疗由革兰氏阴性和革兰氏阳性菌引起的急性单纯性尿路感染（UTIs）[2]。尿路感染是全球最常见的感染之一。尽管大肠杆菌是社区和医院环境中尿路感染的最常见致病菌，但肠球菌属在医院中位列第三位，占导管相关尿路感染的30%，并导致5%的社区获得性尿路感染[3]。最常见的肠球菌种类是粪肠球菌和粪肠球菌，前者更具致病性且具有内在耐药性，后者则以获得性耐药性著称。

肠球菌是一种耐受性强的病原体，对多种抗生素具有内在耐药性。近年来，肠球菌的获得性耐药率有所上升，其中最重要的是对万古霉素的耐药性[3]。FOS对肠球菌（包括耐万古霉素的肠球菌VRE）表现出良好的体外活性[3]。该药物在肾脏中通过肾小球滤过未经代谢直接排出，因此在尿液中浓度较高。FOS适用于肝肾功能不全患者，老年患者和孕妇无需调整剂量[4]。

不幸的是，全球多个中心都报告了对该抗生素的耐药性。已提出多种导致FOS耐药性的机制，包括酶修饰、murA基因突变、形成无活性化合物以及编码FOS转运蛋白的染色体基因突变[5]。其中，几种修饰抗生素的酶（主要是fosA、fosB、fosC、fosX）的出现对FOS的有效性构成了重大挑战。这些酶与FOS结合形成加合物（如谷胱甘肽、L-半胱氨酸、ATP或水），使其失效。此外，还有一些激酶（如FomA和FomB）也促进FOS的耐药性[6]。关于粪肠球菌中FOS耐药性的分子特征的数据很少，尤其是在该地区。因此，本研究旨在评估FOS在粪肠球菌中的体外活性，并阐明其耐药性的分子机制。

研究设计与地点

这项前瞻性描述性研究于2024年1月至2024年12月在克什米尔医学科学研究所（SKIMS）的微生物学系进行。患者的人口统计数据和微生物学数据来自WHONET软件。

样本处理

从SKIMS住院患者或门诊患者（OPD）收集的尿样被接种在血琼脂和麦康凯琼脂上

结果

研究期间从尿样中分离出274株粪肠球菌，其中57株（20.8%）对FOS耐药，217株（79.1%）敏感。女性患者中耐药菌株略多（30株，52.65%），而男性患者中为27株（47.4%），但差异无统计学意义。39岁以上患者中检出更多耐药菌株。尽管大多数耐药菌株...

讨论

FOS对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌具有广谱杀菌活性，主要用于治疗由这些细菌引起的尿路感染。FOS有三种形式：以溶盐形式存在的托美丁、用于口服治疗的钙盐以及用于静脉注射的二钠盐[9]。在革兰氏阳性病原体中，肠球菌是尿路感染的重要致病菌。耐万古霉素的肠球菌（VRE）的出现和传播...

结论

过去认为粪肠球菌是哺乳动物肠道微生物群中的次要成员，但现在它已成为全球医院获得性感染的重要机会性病原体。据我们所知，这是首次在该地区研究粪肠球菌的FOS耐药性。在大多数粪肠球菌分离株中发现fosB基因令人担忧，因为这些基因通常与vanA基因共同存在...

利益冲突声明

无

作者贡献声明

阿里法·巴希尔：方法学。马苏玛·肖卡特：方法学。比斯玛·阿哈德：方法学。纳尔吉斯·巴利：写作——审稿与编辑、初稿撰写、概念构思。萨伊姆·瓦尼：数据管理。安朱姆·阿拉·米尔：方法学、实验研究

利益冲突声明

无

伦理批准

本研究已获得研究所伦理审查委员会的批准，批准号为IEC/SKIMS Protocol no: 151/2024。

资金来源

自筹资金

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。

致谢

作者衷心感谢微生物学部门的技术人员提供的支持与帮助。