在HBV表面抗原消失后慢性乙型肝炎的前瞻性队列中，对HBsAg的超灵敏检测及HBV基因组分析

《Hepatology Communications》：Ultrasensitive detection of HBsAg and HBV genome analysis in a prospective cohort with chronic hepatitis B after HBV surface antigen loss

功能性治愈患者中残留低水平抗原血症及HBV S基因变异与隐匿性感染的关系研究。

　　

摘要

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背景

在慢性乙型肝炎（CHB）中，无论是否经过核苷（NUC）治疗，当HBsAg消失且血清HBV DNA无法检测到时，即定义为功能性治愈（FC），这表明免疫控制有效且预后改善。^1,2然而，FC的发生率很低（每年0.2%–2%），而隐匿性HBV感染（OBI），即肝脏或血清中HBV DNA水平较低（<200 IU/mL），常常持续存在并可能带来临床后果。³HBsAg既可以由共价闭合的环状DNA转录产生，也可以由整合的HBV DNA转录产生；定量（q）HBsAg水平可以反映病毒转录情况，有助于预测FC、HBV再激活风险和肝细胞癌（HCC）的风险。^4,5新型超灵敏HBsAg（uHBsAg）检测方法可能更能够检测到低水平的抗原血症，尽管相关临床数据仍然有限。^6,7我们招募了HBsAg消失（自发或治疗诱导的FC）的个体，使用超灵敏检测方法评估残余HBsAg水平以及与OBI相关的HBV S基因变异。

方法

从6家病毒性肝炎专科诊所招募了HBsAg消失的成人患者，进行了最多3次随访（N=84 [基线时], 60 [第1年], 4 [第2年]）。纳入标准：年龄≥18岁，知情同意，无当前HBV治疗史，有HBsAg阳性病史且HBsAg检测结果为阴性（±抗-HBs血清转化）。排除标准：肝硬化、HCC、正在接受抗病毒治疗、共感染（HCV、丁型肝炎或HIV），或存在严重并发症（如癌症、重大心血管疾病、呼吸系统疾病或精神疾病）。研究获得了卡尔加里大学（REB16-0041, REB19-2038）和参与机构的伦理批准。

临床和病毒学评估包括人口统计学信息、抗病毒治疗史、肝功能指标、通过FibroScan（Echosens）进行的纤维化评估、HBV DNA定量（Abbott或Roche Cobas，定量下限10–15 IU/mL）以及抗-HBs抗体。分别从78名、51名和4名参与者处收集了基线、第1年和第2年的血液样本（图1A）。所有参与者均使用标准商业检测方法（检测下限50 mIU/mL，Elecsys HBsAg II Quant II，Roche Diagnostics或HBsAg QT，Abbott Diagnostics）检测qHBsAg，并使用检测下限低10倍的uHBsAg检测方法重新检测（分析灵敏度为4.62–6.14 mIU/mL，根据说明书信号-截止比值[S/CO] <1.00判为阴性，Architect HBsAg NEXT [Nx]，Abbott Diagnostics）。uHBsAg检测呈阳性的样本进一步使用HBsAg NEXT确认检测方法进行评估（Abbott Diagnostics），该方法包括重复检测和中和步骤。抗-HBs抗体结果通过临床检测或研究样本获得（Elecsys Anti-HBs II，Roche）。在75个样本中，从1个时间点收集的5 mL血清中通过超速离心（40,000 RPM，22小时，4°C）分离DNA，或从2个时间点合并DNA。HBV表面（S）序列（核苷酸478–774，氨基酸109–207）通过直接PCR和嵌套PCR扩增，然后进行Sanger测序（Eurofins Genomics；检测下限10–20 IU/mL），并与GenBank参考序列进行比对。^{8系统发育分析（MEGA 11）和序列比对发现了与HBV免疫/诊断逃逸相关的单核苷酸多态性。}