一种环保、痕量级且可同时检测多种分析物的UPLC-APCI-MS/MS方法，用于测定伊美格林（Imeglimin）中的基因毒性亚硝胺

《Microchemical Journal》：Eco-friendly, trace-level, and multianalyte UPLC-APCI-MS/MS method for simultaneous quantification of genotoxic nitrosamines in imeglimin

硝基胺污染检测新方法：基于UPLC-APCI-MS/MS同时测定伊梅格利敏盐酸盐中七种硝基胺，符合ICH Q2(R2)规范，验证了高灵敏度（LOQ 0.15-0.79 ng/ml）、精密度（RSD<5%）及环保特性（通过MoGAPI等工具评估）。

　　近年来，随着对药品安全性的高度重视，硝胺类化合物（Nitrosamines）在制药行业中的检测问题逐渐成为研究热点。硝胺类化合物被广泛认为是潜在的人类致癌物，尤其在药物制造过程中，其存在可能对患者健康构成威胁。因此，开发一种能够准确、高效地检测药物中硝胺类杂质的方法，对于确保药品质量与安全至关重要。本文针对 imeglimin 氢氯化物中七种硝胺类化合物（包括 NDMA、NMEA、NDEA、NIPEA、NDIPA、NMBA 和 NDBA）的检测，提出了一种基于超高效液相色谱-大气压化学电离-串联质谱（UPLC-APCI-MS/MS）的新型分析方法。

该方法的开发基于对现有检测技术的评估与改进。传统的高效液相色谱（HPLC）方法虽然在杂质分析中被广泛应用，但其检测灵敏度和分析效率相对较低，且检测周期较长。相比之下，液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）具有更高的灵敏度和选择性，能够实现对低浓度杂质的精准识别。然而，目前尚无针对 imeglimin 氢氯化物中多种硝胺类化合物的系统检测方法，这使得其在药品质量控制中存在一定的挑战。因此，本文旨在通过优化色谱与质谱参数，建立一种高效、灵敏、适用性强的分析流程，以满足药品安全监管的要求。

在方法开发过程中，研究团队首先对色谱条件进行了优化。考虑到硝胺类化合物的分子特性，尤其是其疏水性，选择了合适的流动相组成和缓冲液 pH 值。流动相由水和甲醇组成，分别作为流动相 A 和 B，其中加入了 0.1% 的甲酸以提高分离效果。色谱柱采用五氟苯基柱，该类型柱子在分离具有不同极性的化合物时表现出良好的性能。通过梯度洗脱方式，实现了对七种硝胺类化合物的有效分离。整个分析过程的运行时间为 22 分钟，流速为 0.6 毫升/分钟，能够在较短时间内完成检测任务，提高了分析效率。

为了确保检测的准确性与可靠性，该方法依据国际药典（ICH）Q2(R2) 指南进行了系统验证。验证过程中，重点考察了方法的线性范围、精密度、准确度以及稳定性。实验结果表明，该方法在定量下限（LOQ）至 150% 的规格限之间表现出良好的线性关系（R > 0.999），说明其能够准确地识别和定量低浓度的硝胺类杂质。此外，系统精密度、方法精密度和中间精密度的相对标准偏差（% RSD）均控制在合理范围内，进一步证明了该方法的稳定性与重复性。

在方法的绿色性和可持续性方面，研究团队采用了多种评估工具，如 MoGAPI、AGREE 和 Analytical Eco-Scale，以衡量该方法对环境的影响。同时，通过 Click Analytical Chemistry Index（CACI）对方法的实用性进行了评估。结果显示，该方法在 CACI 指标上取得了较高的分数，表明其不仅具备良好的分析性能，而且在实际应用中具有较高的可行性。这一特性使其能够在药品的日常质量检测中发挥重要作用，为制药企业提供了可靠的检测手段。

此外，该方法在样品前处理方面也表现出显著优势。传统的硝胺类化合物检测方法通常需要复杂的样品提取过程，而本文提出的方法则通过简化样品前处理步骤，减少了对昂贵内标物的依赖。这种方法不仅降低了实验成本，还提高了操作的便捷性，使得检测过程更加高效。同时，使用水作为稀释剂，进一步减少了有机溶剂的使用，符合绿色化学的发展趋势。

在药品质量控制的背景下，硝胺类化合物的检测不仅是对药品安全性的保障，也是对药品合规性的要求。目前，欧洲药品管理局（EMA）和美国食品药品监督管理局（FDA）已对硝胺类化合物的可接受摄入量和浓度阈值进行了明确规定。例如，对于 imeglimin 氢氯化物，当每日最大剂量为 2000 毫克时，其对应的可接受摄入量为 13.25 部分每十亿（ppb），即 26.5 纳克/天（ng/day）的 NDEA、NIPEA、NDIPA 和 NDBA，以及 48.0 ppb 的 NDMA 和 NMBA，以及 9.0 ppb 的 NMEA，对应 18 ng/day 的 NMEA。这些数据表明，硝胺类化合物的检测需要在极低浓度范围内进行，以确保药品的安全性。

在现有文献中，关于 imeglimin 氢氯化物中硝胺类化合物的检测方法较少。尽管已有部分研究使用了 HPLC、LC-Q-ToF 和 NMR 等技术对 imeglimin 的杂质谱进行分析，但尚未有针对硝胺类化合物的 UPLC-APCI-MS/MS 方法被报道。因此，本文提出的分析方法填补了这一空白，为药品质量控制提供了新的思路和技术支持。

综上所述，本文开发的 UPLC-APCI-MS/MS 方法具有以下几个显著特点：首先，它是目前首个专门用于检测 imeglimin 氢氯化物中七种硝胺类化合物的分析方法；其次，该方法能够同时检测多种潜在的基因毒性杂质，提高了检测的全面性；再次，该方法在绿色性和可持续性方面表现出色，符合当前制药行业对环保的要求；最后，该方法在样品前处理和分析过程中具有较高的简便性，降低了实验成本，提高了检测效率。这些优势使其在药品质量检测中具有广泛的应用前景，能够为制药企业提供可靠的检测手段，确保药品的安全性与合规性。