中药曲溪方通过调节肠道放线菌诱导的细胞凋亡和抗癌免疫作用，抑制结肠癌肝转移

《Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine》：Chinese Herbal Medicine Quxie Formula Inhibits Colon Cancer Liver Metastasis through Modulating Gut Actinobacteria Induced Apoptosis and Anti-cancer Immunity

中药复方QX通过调节肠道拟杆菌属抑制结直肠癌肝转移的机制。体外实验表明QX含血清促进Bifidobacterium adolescentis增殖，其共培养上清诱导HCT-116细胞凋亡，激活Caspase3/8/9通路及Bax/Bid-Bcl-2失衡。体内实验证实QX（10-20mg/kg/d）显著降低肝转移瘤负荷，增强CD8+ T细胞和血清TNF-α、IFN-γ水平，恢复肝转移灶NK细胞活性。UPLC-Q-TOF-MSE鉴定69种活性成分。

　　肝转移是结直肠癌患者死亡的主要原因，这一现象长期以来引起了医学界的广泛关注。传统中药方剂“祛邪方”（QX）已被证实可以延长生存期、改善免疫功能，并调节肠道菌群，尤其是在肝转移性结直肠癌（mCRC）患者中，QX能够显著增加**放线菌门**（Actinobacteria）的丰度。尽管如此，QX的具体作用机制仍然存在许多未解之谜。为了深入探讨QX对肝转移的抑制作用及其与肠道菌群的关系，研究团队通过体外和体内实验相结合的方式，对QX的药理作用进行了系统分析。

在体外实验中，研究人员从大鼠体内提取含有QX成分的血清，并利用三种**放线菌门**的菌株：**青春双歧杆菌**（B. a.）、**链霉菌**（Streptomyces carpaticus）和**芽孢杆菌**（Bacillus）进行共培养。通过筛选菌株的生长情况，最终选择了QX与青春双歧杆菌的共培养产物，用于评估其对HCT-116细胞的凋亡诱导效果。此外，研究还通过阻断**Caspase3**、**Caspase8**和**Caspase9**三条凋亡通路，进一步探索QX如何调控凋亡过程。结果显示，QX-青春双歧杆菌共培养产物能够显著提高HCT-116细胞的凋亡率，且其作用机制涉及Bcl-2/Bax信号通路的激活。

在体内实验中，研究人员构建了CT-26肝转移小鼠模型，并在模型建立前使用抗生素混合物（如氨苄西林、庆大霉素、甲硝唑和万古霉素）破坏肠道菌群。随后，小鼠接受了为期14天的QX煎剂治疗，剂量分别为10mg、15mg和20mg（每日）。实验结果表明，不同剂量的QX均能显著降低肝转移肿瘤负荷，其中20mg剂量的效果最为明显。同时，QX治疗显著增加了小鼠肠道中**放线菌门**、**拟杆菌门**（Bacteroidetes）和**厚壁菌门**（Firmicutes）的丰度，表明QX能够调节肠道菌群结构。此外，QX还显著提高了肝转移组织中**Caspase3**、**Caspase8**和**Caspase9**的蛋白表达水平，并增强了外周血中CD8+ T细胞的比例，以及**肿瘤坏死因子α**（TNF-α）和**干扰素γ**（IFN-γ）的分泌水平。这些结果提示QX不仅能够通过调控凋亡通路抑制肿瘤生长，还能增强抗肿瘤免疫反应。

进一步的实验发现，QX能够恢复肝转移组织中NK细胞的靶向杀伤能力。NK细胞是先天免疫系统的重要组成部分，其功能的恢复可能对抑制肿瘤转移具有重要意义。此外，通过UPLC-Q-TOF-MSE分析，研究人员初步鉴定了QX煎剂和含药血清中69种分子化合物，其中一些成分可能对肠道菌群和免疫系统产生特定的调节作用。例如，**酸橙果**（Fructus Aurantii Immaturus）中的**柚皮苷**（naringin）已被证明能够促进短链脂肪酸生成菌的增殖，而**吴茱萸**（Evodia rutaecarpa）中的**吴茱萸碱**（evodiamine）则能够抑制高脂饮食诱导的结肠炎相关癌变。这些发现表明，QX的抗肿瘤作用可能与其调节肠道菌群并促进免疫细胞功能密切相关。

研究还发现，QX在体外实验中对三种**放线菌门**菌株的生长影响不同。其中，**芽孢杆菌**在QX干预下呈现持续抑制，而**链霉菌**和**青春双歧杆菌**则表现出不同程度的促进作用。特别是**青春双歧杆菌**，其在QX血清和煎剂的共同作用下，其增殖能力显著增强。这一现象可能与QX中某些特定成分的促菌作用有关。此外，QX的体内实验进一步证实了其对肠道菌群的调节作用，且不同剂量的QX对菌群的影响具有剂量依赖性。值得注意的是，QX的某些成分能够被吸收进入血液，这为理解其全身性作用提供了重要依据。

尽管QX显示出良好的抗肿瘤潜力，但研究仍存在一些局限性。首先，虽然通过共培养实验初步筛选了可能的活性成分，但未能完全鉴定出具体负责诱导凋亡和调节免疫的化合物。因此，进一步的代谢组学分析将有助于揭示QX的分子机制。其次，QX的抗肿瘤效果目前仅在HCT-116细胞中进行了评估，尚未在其他结直肠癌细胞系中进行验证。这可能限制了研究结果的普遍适用性。最后，研究中并未使用无菌小鼠模型来进一步验证**青春双歧杆菌**在QX抗肿瘤作用中的直接贡献，未来研究可考虑引入无菌模型以更清晰地揭示肠道菌群在QX治疗中的作用。

总体而言，这项研究为QX通过调节肠道菌群和免疫系统发挥抗肿瘤作用提供了新的视角。QX不仅能够通过促进**放线菌门**的增殖，进而激活凋亡信号通路，还能够增强NK细胞和T细胞的抗肿瘤功能。这些发现不仅有助于理解QX的药理机制，也为未来开发基于QX的新型肠道菌群调节剂提供了理论依据。然而，进一步的研究仍需深入探讨QX的具体成分及其在不同癌种中的作用机制，以期为临床治疗提供更坚实的科学支持。