来自云南异孔菌（Isotrema yunnanense）根部的结构多样的倍半萜类化合物及其镇痛和抗炎活性

《Phytochemistry》：Structurally diverse sesquiterpenes from the roots of Isotrema yunnanense and their analgesic and anti-inflammatory activity

本文从云南土防己根部分离并鉴定了五种新型倍半萜类化合物，包括首次报道的二聚体倍半萜内酯neoversicolactone（1）及yunnadolins A–D（3–6），并重新鉴定了versicolactone D（2）。通过谱学分析和单晶X射线衍射确认结构，体外及体内实验显示这些化合物均具有显著的镇痛活性，其中化合物6表现出突出的NO抑制活性，其抗炎机制与抑制MAPK/NF-κB通路相关。

　　

Xishan Bai|李张|Qiarebati Tuerkesitan|闫子瑶|李旭晓|王子良|刘洪成|郭立群|李艳红|黄向忠

中国教育部民族医药资源化学重点实验室，云南民族大学民族医药学院，昆明，650504，中国

摘要

从Isotrema yunnanense的根中分离出了五种未描述的倍半萜类化合物，包括一种具有罕见骨架结构的双体倍半萜内酯（neoversicolactone，1），四种倍半萜（yunnadolins A–D，3–6），以及一种重新鉴定的双体倍半萜内酯（versicolactone D，2），同时还发现了十二种已知化合物。这些化合物的结构通过光谱分析、单晶X射线衍射和计算电子圆二色性得到了确认。此外，还对其镇痛和抗炎活性进行了体内和体外评估。所有化合物均表现出显著的抗痛活性，抑制率最高可达59.5%，但1和2除外。6和15–17化合物的NO抑制效果更好，其IC₅₀值分别为17.4 ± 2.9、14.1 ± 2.0、18.4 ± 0.3和12.8 ± 3.0 μM。进一步的研究表明，6通过抑制MAPK/NF-κB通路发挥抗炎作用，并且还显示出有效的抗类风湿关节炎活性。

引言

Isotrema yunnanensis（Franch.）X.X. Zhu, S. Liao & J.S. Ma原产于中国云南省，属于马兜铃科（Aristolochiaceae），之前被命名为Aristolochia yunnanensis Franch>。作为一种传统草药，它被云南地区的少数民族广泛用于治疗滴虫病、高血压、风湿痛以及胃肠道疾病，如肠炎、痢疾、腹痛和腹泻（Song, 1999）。植物化学研究表明，该植物富含多种类型的倍半萜类化合物，如葎草烯型（Cheng et al., 2013）、aristophyllene型（Chen et al., 2017）、germacrane型（Lou et al., 2019a）和hydroazulene型（Du et al., 2014）倍半萜。作为I. yunnanensis的主要成分，这些倍半萜类化合物已被报道具有细胞毒性和抗心肌纤维化作用（Du et al., 2014; Lou et al., 2019a; Shao et al., 2014）。然而，关于I. yunnanensis的有效成分及其临床应用的深入研究仍较为缺乏。

尽管I. yunnanensis长期以来被用于缓解各种疼痛症状，如风湿痛、腹痛和胸痛，但其具体成分和作用机制尚未明确。因此，本研究通过生物活性引导的方法对I. yunnanensis提取物进行了分离，并评估了分离出的化合物的镇痛和抗炎活性，以发现新的代谢产物，并阐明其镇痛作用的相关化学成分。选择从I. yunnanensis根的EtOH残渣中提取的EtOAc提取物进行进一步的植物化学分离（表S1，支持信息），该提取物表现出更好的抗痛活性。随后，使用乙酸诱导的痛觉模型和脂多糖（LPS）刺激的RAW 264.7细胞模型评估了分离出的化合物的抗痛和抗炎活性。本文详细描述了化合物的分离过程、结构鉴定和生物学评价，以及其抗炎机制。

结构鉴定

化合物1呈无色针状晶体，根据其HRESIMS离子峰（m/z 471.2862 [M+Na]⁺（C₃₀H₄₀O₃Na⁺的计算值为471.2870，图S2，支持信息）推断其分子式为C₃₀H₄₀O₃，含有11个不饱和键。¹H NMR谱（表1，图S4，支持信息）显示了特征性信号，如四个烯烃质子，分别位于δ_H 5.64（1H, s, H-5'）、5.14（1H, br d, J = 12.5 Hz, H-1）、5.07（1H, m, H-9'）和4.71（1H, 重叠, H-1'）。

结论

总之，从I. yunnanensis的根中分离并鉴定了五种未描述的倍半萜（1和3–6），包括一种具有罕见骨架结构的双体倍半萜内酯，以及十三种已知化合物（2和7–18）。通过小鼠的乙酸诱导扭体实验评估了它们的镇痛活性。所有化合物均表现出显著的抗痛活性，抑制率最高可达59.5%，但1和2除外。

一般实验程序和化学品

柱层析（CC）使用了硅胶（200–300目，青岛海洋化工有限公司）和Sephadex LH-20。半制备分离采用了配备Eclipse XDB-C₁₈（9.4 mm × 250 mm, 5 μm）柱子的Agilent 1260高效液相色谱仪。Bruker AM-400光谱仪用于记录NMR谱。化学位移以ppm（δ）表示，以四甲基硅烷（TMS）为内标（CDCl₃，δ_H = 7.26 ppm, δ_C =

CRediT作者贡献声明

Xishan Bai：撰写 – 原始草稿、方法学、研究、数据管理、概念构思。 Qiarebati Tuerkesitan：方法学、研究、数据管理。 李张：方法学、研究、数据分析、数据管理。 李旭晓：方法学、研究、数据管理。 闫子瑶：方法学、研究。 刘洪成：方法学、数据管理。 王子良：方法学、数据管理。 李艳红：项目管理、方法学、概念构思。 郭立群：

未引用参考文献

Rahelivao et al., 2015; Song, 1999.

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。

致谢

本研究得到了云南省重大科技项目（202402AA310023）、云南省基础研究项目（202201AS070012和202201AU070045）、国家自然科学基金（32200307）以及云南省高校服务重点产业科技项目（FWCY-ZNT2024019）的支持。