杂合无义突变 FLI1 p.Met100* 变体会导致血小板减少以及红细胞相关基因表达增加

《Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis》：Heterozygous nonsense FLI1 p.Met100* variant results in thrombocytopenia and increased erythroid gene expression

该研究揭示FLI1 p.Met100*突变通过显性负效应干扰巨核细胞发育，导致血小板减少并伴随红系特征异常。

　　

张欢|Elise J. Huisman|Roel van Rhijn|Arthur F. Svendsen|Hans Janssen|Nicole van der Wel|Carmen van der Zwaan|Nynke Gillemans|Wilfred F.J. van IJcken|Marten Hansen|Marjon H. Cnossen|Sjaak Philipsen|Arie J. Hoogendijk|Emile van den Akker

Sanquin Research and Landsteiner Laboratory, 阿姆斯特丹大学医学中心, 阿姆斯特丹, 荷兰

摘要

背景

巨核细胞和血小板由造血干细胞和前体细胞通过一个严格调控的过程产生，该过程涉及多种转录因子，包括红细胞生成特异性（ETS）家族成员FLI1。FLI1中的致病性变异，尤其是那些影响ETS DNA结合结构的变异，已被证实与遗传性血小板疾病有关，并与异常的巨型α颗粒形成相关，如Paris-Trousseau综合征中所见。然而，其具体的病理生理机制仍不清楚。

目的

我们描述了一名携带新生杂合无义突变FLI1 p.Met100*（c.297del）的患者，并研究该突变对巨核细胞生成的影响。我们假设这种突变会产生一种截短的蛋白质，从而对巨核细胞的成熟产生显性负效应。

方法

在Meg01细胞中表达了野生型（WT）FLI1和FLI1 p.Met100*。通过批量RNA测序、蛋白质组学和流式细胞术来评估它们的功能后果。

结果

Western blot分析证实Meg01细胞中表达了截短的FLI1 p.Met100*蛋白。基因集富集分析显示，WT FLI1增强了巨核细胞表型，同时抑制了红细胞表型，而FLI1 p.Met100*则同时上调了这两种表型。流式细胞术结果显示，WT FLI1降低了红细胞标志物CD235a和KLF1的表达，而FLI1 p.Met100*则提高了它们的表达。此外，WT FLI1促进了巨核细胞的成熟和黏附，这通过巨核细胞标志物CD61以及黏附标志物CD34和CD44的表达增加得到证实。我们还通过免疫沉淀实验证明了WT FLI1和FLI1 p.Met100*都能与共同的辅因子相互作用。

结论

综合我们的研究结果，FLI1 p.Met100*通过显性负效应阻碍了巨核细胞的成熟，可能通过促进红细胞特征而影响血小板的生成，从而导致血小板减少。

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  血小板由干细胞生成，其生成受FLI1等基因的调控。
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  我们研究了一名携带FLI1基因罕见突变的患者。
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  这种异常的FLI1蛋白导致了具有红细胞特征的缺陷性血小板。
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  这项研究有助于更好地理解健康和疾病状态下的血小板发育过程。