通过卵内接种单价和双价马立克病疫苗，能够增强肉鸡的先天免疫反应和细胞介导的免疫反应

《Vaccine》：Ability to accelerate innate and cell-mediated immune responses in meat-type chickens by in ovo vaccination with monovalent and bivalent Marek's disease vaccines

本研究评估了HVT、CVI-988和SB-1三种马立克氏病疫苗在肉鸡胚胎中的免疫效果，发现均能增强先天和适应性免疫反应，但存在差异，如SB-1显著提高激活巨噬细胞和DP细胞频率，而CVI-988降低部分指标。联合疫苗中HVT+CVI-988在干扰素基因表达上协同增效，但未影响其他免疫表型。

　　在本研究中，科学家们探讨了三种用于预防马立克氏病（Marek's disease, MD）的疫苗——HVT（Herpesvirus of Turkey）、CVI-988（一种弱毒的MDV-1病毒）以及SB-1（一种MDV-2病毒）——在胚胎期（18天）通过“卵内接种”方式对肉鸡（meat-type chickens）的先天免疫和适应性免疫反应的影响。此外，还评估了这些疫苗之间是否存在协同增强免疫效果的潜力。研究结果表明，这三种疫苗在一定程度上都能增强雏鸡的脾脏中γδ T细胞、CD4+CD28+、CD4+CD44+、CD8+CD28+以及CD8+CD44+ T细胞的频率，与未接种的对照组相比。然而，不同疫苗在组织嗜性、对PHA-L诱导的翼膜厚度增加以及某些免疫表型频率上的表现存在差异。例如，SB-1和HVT组的激活单核细胞/巨噬细胞、CD4+CD8+双阳性（DP）细胞以及CD4+MHC-II+细胞的频率显著高于未接种组。而SB-1接种的雏鸡在CD4+ T细胞频率方面表现更为突出，与CVI-988和对照组相比有显著差异。相比之下，CVI-988接种则显著降低了DP细胞、CD4+CD28+以及CD4+CD44+ T细胞的频率。此外，CVI-988与HVT的联合接种在脾脏中观察到了IFN-β和IFN-γ的转录水平显著提升，表明可能存在免疫协同增强效应，但对免疫表型没有显著影响。综合来看，尽管这三种疫苗都能在一定程度上促进肉鸡的免疫反应，但它们之间的相互作用和免疫增强效果仍需进一步研究。

### 研究背景

马立克氏病是由一种α疱疹病毒——马立克氏病病毒（MDV）引起的疾病，该病毒属于Mardivirus属。目前，MDV被归类为鸡的α疱疹病毒2型（gallid alphaherpesvirus 2，也称为MDV-1），其中包括具有致癌性的病毒株。此外，该属还包括两种非致癌性的病毒株：鸡的α疱疹病毒3型（gallid alphaherpesvirus 3，也称为MDV-2）和火鸡疱疹病毒（HVT，也称为MDV-3）。目前，已有多种活疫苗基于这些病毒株进行生产并获得许可，它们在控制马立克氏病方面发挥了重要作用，自1968年以来已被广泛应用。

HVT是一种被广泛研究的疫苗，它在18天胚胎期（ED）进行卵内接种，相较于在孵化后接种，可以更有效地提升雏鸡的免疫能力。HVT在雏鸡体内不会引起严重的组织病变或死亡，并且对母源抗体不敏感。然而，CVI-988和SB-1这两种疫苗的卵内接种效果则有所不同。例如，CVI-988在18天胚胎期接种后，虽然在免疫反应方面表现良好，但其在胚胎组织中的复制能力有限，而在孵化后则能够被检测到。SB-1同样在18天胚胎期接种后，其在胚胎组织中的复制能力较低，但在孵化后也能检测到。因此，研究这些疫苗在卵内接种后的免疫增强效果及其与其他疫苗的相互作用，对于理解它们在不同鸡种中的免疫调节机制具有重要意义。

### 研究方法

本研究采用了一种系统的实验设计，以评估卵内接种疫苗对肉鸡免疫状态的影响。研究共进行了三个实验：

1. **实验1**：评估卵内接种疫苗对初始细胞免疫反应（如PHA-L诱导的翼膜厚度增加）和体液免疫反应（如KLH诱导的IgG抗体水平）的影响。使用了HVT、SB-1、CVI-988及其二联疫苗（HVT+SB-1和HVT+CVI-988），并以未接种的雏鸡作为对照组。
2. **实验2**：分析卵内接种疫苗对脾脏中先天免疫细胞（如单核细胞/巨噬细胞）和细胞介导免疫细胞（如γδ T细胞）的影响，使用流式细胞术进行免疫表型分析。
3. **实验3**：评估疫苗在胸腺、法氏囊、脾脏和肺部的复制情况，并检测疫苗接种后脾脏中细胞因子基因的表达水平，以了解其对免疫反应的调控作用。

在实验过程中，所有疫苗均按照制造商推荐的剂量进行接种，并且在接种后对雏鸡的免疫反应进行了系统评估。此外，通过定量PCR（qPCR）技术对疫苗DNA进行检测，并对细胞因子基因的表达水平进行相对定量分析。

### 研究结果

研究结果显示，卵内接种HVT、CVI-988和SB-1均能显著提升雏鸡脾脏中γδ T细胞、CD4+CD28+、CD4+CD44+、CD8+CD28+以及CD8+CD44+ T细胞的频率。然而，不同疫苗在免疫表型的提升上存在差异。例如，SB-1和HVT组在激活单核细胞/巨噬细胞、DP细胞和CD4+MHC-II+细胞的频率方面显著高于未接种组。相比之下，CVI-988接种则显著降低了DP细胞、CD4+CD28+和CD4+CD44+ T细胞的频率。

此外，研究还发现CVI-988与HVT的联合接种能够显著提升脾脏中IFN-β和IFN-γ的转录水平，表明可能存在免疫协同增强效应。然而，这种协同效应并未在免疫表型上体现出来。这可能是因为细胞因子的转录变化在雏鸡出生后早期即可观察到，而细胞免疫反应的变化则可能需要更长时间来显现。

在疫苗复制方面，HVT是唯一能在胸腺和法氏囊中检测到的疫苗，而CVI-988和SB-1则主要在胸腺和法氏囊中复制。值得注意的是，当HVT与CVI-988或SB-1联合接种时，其在不同组织中的复制能力发生了变化。例如，HVT在联合接种后在胸腺中的复制能力增强，而在脾脏中的复制能力则有所下降。这种组织特异性的复制变化可能影响疫苗的整体免疫增强效果。

### 讨论

本研究的主要发现是，尽管HVT、CVI-988和SB-1均能增强雏鸡的免疫反应，但它们的免疫增强效果存在差异。例如，SB-1在提升CD4+ T细胞和CD4+MHC-II+细胞频率方面表现更为突出，而CVI-988则显著降低了DP细胞、CD4+CD28+和CD4+CD44+ T细胞的频率。这些差异可能与疫苗的组织嗜性、免疫激活机制以及对不同免疫细胞类型的影响有关。

进一步分析表明，疫苗的协同效应可能与其在不同组织中的复制能力有关。例如，HVT与CVI-988的联合接种显著提升了IFN-β和IFN-γ的转录水平，而这种提升可能促进了更广泛的免疫反应。然而，这种协同效应并未在免疫表型上得到体现，说明免疫增强可能涉及多种机制，而不仅仅是细胞因子的表达。

此外，研究还发现，不同疫苗在卵内接种后的免疫反应可能受到组织特异性因素的影响。例如，HVT在胸腺和法氏囊中的复制能力较强，而CVI-988和SB-1则主要在胸腺和法氏囊中复制。这种差异可能解释了它们在免疫反应上的不同表现。因此，理解疫苗在不同组织中的复制能力和免疫激活机制，对于优化疫苗接种策略和提升免疫效果具有重要意义。

综上所述，卵内接种疫苗在提升肉鸡的免疫反应方面具有显著效果，但不同疫苗的免疫增强机制和效果存在差异。此外，疫苗之间的协同效应可能需要进一步研究，以了解其在免疫调节中的潜在作用。这些发现为未来的疫苗研发和应用提供了重要的理论依据和实践指导。