一种高效的保护性嵌合抗体C8A8的研发，该抗体针对猫和犬细小病毒

《Veterinary Microbiology》：Development of a potent protective felinized chimeric antibody C8A8 targeting feline and canine parvovirus

猫泛白细胞减少症（FPL）是由FPV引起的高致死率疾病，现有治疗手段不足。本研究构建了murine-derived felinized嵌合抗体C8A8，其靶向FPV VP2蛋白1-9位保守 epitope，结合亲和力测定（EC50=0.038μg/mL）及中和实验，证实C8A8对FPV及其跨物种变异株（RDPV、CPV-2a/b/c）具有广谱中和活性。猫模型实验显示，每日2mg/kg剂量连续给药5天可完全预防FPV感染，证实其作为抗FPL治疗候选药物的潜力。

　　

孙亚杰|张成祺|刘佳佳|郭定瑞|李双双|徐丽文|胡波|曾海峰|刘亚文|傅建海|张志创|曹文宇|白雪

农业部特种动物疫病重点实验室，中国农业科学院特种动植物科学研究所吉林省国际合作特种动植物科技创新重点实验室，长春130112，中国

摘要

猫泛白细胞减少症（FPL）是影响猫的最致命的传染病之一，其特征是严重的白细胞减少、持续发热和危及生命的腹泻。目前可用的临床治疗方法仍然不足。在这项研究中，我们构建了一种源自小鼠的、经过猫化改造的嵌合抗体C8A8。通过5′/3′ RACE方法对源自小鼠的抗猫细小病毒（FPV）单克隆抗体的可变区进行测序，然后将其与源自猫的单克隆抗体的恒定区融合。这种重组抗体在CHO-S细胞中表达。表位分析显示，C8A8针对的是FPV VP2蛋白N端的一个保守表位（残基1-9）。亲和力测定表明，C8A8对FPV VP2蛋白具有高结合亲和力，EC??值低至0.038 μg/mL。此外，C8A8对FPV、貉细小病毒（RDPV）、犬细小病毒2型（CPV-2）及其变体CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c表现出强烈的中和和血凝抑制活性。在一只感染FPV的英短毛猫模型中，连续五天每天给予低剂量（2 mg/kg）的C8A8可完全保护动物。我们的结果表明，C8A8具有广谱疗效、低免疫原性，并且具有大规模生产的潜力，显示出作为治疗FPV感染药物候选物的前景。

引言

猫泛白细胞减少症（FPL），也称为猫瘟或传染性肠炎，是由猫细小病毒（FPV）引起的最致命的疾病之一（Barrs, 2019）。FPV感染的特点是明显的白细胞减少、高烧和出血性腹泻，常导致严重脱水、继发感染，易感动物的死亡率超过80%（Luo et al., 2024, Li et al., 2024）。尽管疫苗接种是预防FPL的基石，但FPV的高突变率使其能够逃避免疫系统，导致即使已接种疫苗的个体也会发生突破性感染（Mustafa and Mohammed, 2024, Rehme et al., 2022）。目前，针对FPV的特异性抗病毒药物有限，临床管理主要依赖于支持性治疗，包括补液、广谱抗生素和营养补充（Li et al., 2024, Proksch et al., 2018）。因此，迫切需要开发新的治疗策略来阻止疾病进展。

单克隆抗体（mAbs）由单个B细胞克隆产生（Alejandra et al., 2023），通过识别抗原上的独特表位而表现出高特异性（Wang et al., 2024）。最早的治疗用单克隆抗体来源于小鼠，但在人体内常常会引起强烈的免疫反应（Salah et al., 2025, Yamaguchi et al., 2024, Wang et al., 2025a, Castelli et al., 2019）。这些局限性推动了抗体工程的显著进步，导致了嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体的开发（Tapryal, 2025, Chames et al., 2009）。尽管基于mAb的疗法在人类医学中取得了显著的临床成功，但其在兽医医学中的应用——尤其是在伴侣动物中——仍然有限且大多处于研究阶段（Wang et al., 2025b）。

通过将小鼠单克隆抗体的可变区与猫单克隆抗体的恒定区融合，可以生成源自猫的嵌合抗体，从而降低免疫原性并改善药代动力学特性。这种策略保持了高亲和力、特异性、延长的血清半衰期和良好的生物相容性，同时还具有低成本和高表达效率等优点（Doki et al., 2016, Ko et al., 2022）。

在这项研究中，我们使用了源自猫的嵌合抗体C8A8来识别多种细小病毒共有的保守中和表位，并指导针对猫泛白细胞减少症的治疗性抗体的设计。

部分内容摘录

动物

本研究招募了9只55天大的英短毛猫，这些猫对FPV抗体呈血清阴性（HI滴度< 1:4）。所有动物操作和样本采集均按照国家兽医医学研究中心动物护理和伦理委员会批准的方案进行。

细胞系和病毒

分泌抗FPV VP2单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系是通过用纯化的VP2蛋白免疫BALB/c小鼠建立的，该细胞系保存在中国农业科学院特种动植物科学研究所。

表位定义和同型分析

为了精确确定小鼠单克隆抗体识别的表位，对FPV的VP2蛋白进行了逐步截断并通过酶联免疫吸附测定（ELISA）进行分析。如图1A所示，全长VP2蛋白最初被分为三个重叠片段：A1（1-876个氨基酸）、A2（439-1314个氨基酸）和A3（877-1755个氨基酸）。在这些片段中，抗体对A1的结合最强，而对A2和A3的结合反应显著减弱（p < 0.001），表明主要结合位点位于A1上。

讨论

嵌合抗体是治疗性抗体工程中的一个关键进展，其特点是能够在显著降低免疫原性的同时保持抗原结合特异性（Wang et al., 2025b）。然而，它们在伴侣动物医学中的应用仍然有限，高亲和力的猫特异性抗体的商业化开发仍处于初级阶段（Chiu et al., 2019）。

在本研究中，我们成功开发了一种...

伦理声明

这项动物研究获得了中国农业科学院特种动植物科学研究所实验室动物管理和福利伦理委员会的批准（批准编号ISAPSAEC-2024-035）。研究过程符合当地法律法规和机构要求。

作者贡献

Y.S.和X.B.设计了实验；Y.S.和C.Z.执行了实验；J.L.、D.G.、S.L.和L.W.进行了数据研究和解释；B.H.、H.Z.、Y.L.、J.F.、Z.Z.和W.C.提供了试剂/材料/分析工具；Y.S.撰写了论文。所有作者都阅读并批准了最终稿件。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

资助

本工作得到了吉林省科学技术发展计划（编号20250202056NC）的支持。

作者贡献声明

曹文宇：软件、资源支持。孙亚杰：撰写——初稿、验证、方法学、数据分析、概念构思。白雪：撰写——审稿与编辑、资金筹集、概念构思。张成祺：验证、方法学、数据分析、数据管理。刘佳佳：验证、方法学、实验研究。曾海峰：软件、资源支持。刘亚文：软件、资源支持。傅建海：软件、资源支持。张志创：软件、资源支持。徐丽文：

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。