克里米亚-刚果出血热病毒复制子颗粒疫苗诱导小鼠持久体液免疫与长期保护作用研究

《npj Vaccines》：Durable humoral immunity and long-term protection induced by a Crimean-Congo hemorrhagic fever virus replicon particle vaccine in mice

针对克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）这一WHO优先病原体缺乏长效疫苗的难题，本研究通过小鼠模型评估CCHFV复制子颗粒疫苗（VRP）的长期免疫效果。结果显示，单剂或双剂接种均可激发持续18个月的特异性IgG抗体，且加强接种显著提升抗体亲和力与Fc效应功能（如ADCD、ADCP），保护效力在12个月内维持≥75%。该研究为CCHFV疫苗的临床持久性应用提供了关键证据。

　　

克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）是一种由蜱虫传播的高致死性病原体，被世界卫生组织（WHO）列为优先防控的传染病之一。其感染可引发严重出血热症状，病死率高达4%-40%，且流行范围覆盖亚、非、欧三大洲，每年在土耳其等地区造成数千例感染。然而，目前全球尚无获批的CCHFV疫苗，现有医疗对策极为有限。疫苗的持久保护力是评价其临床价值的关键指标，传统减毒活疫苗或病毒样颗粒（VLP）疫苗虽能诱导长期免疫，但存在安全性或生产复杂性挑战。病毒复制子颗粒（VRP）作为一种非复制型疫苗平台，兼具安全性高与免疫原性强的优势，此前已证明对拉沙病毒（LASV）和尼帕病毒（NiV）等病原体具有快速保护效果，但其长期免疫持久性尚未系统评估。

为攻克这一难题，美国疾控中心（CDC）等机构的研究团队在《npj Vaccines》发表最新研究，通过长达18个月的小鼠实验，系统分析了CCHFV VRP疫苗诱导的体液免疫应答与保护效力动态。研究采用C57BL/6J小鼠模型，分别设单剂（prime-only）与双剂（prime-boost，间隔28天）接种组，皮下注射1×10⁵ TCID₅₀的CCHFV VRP疫苗，并在接种后多个时间点（6天至18个月）采集血液与组织样本，结合致死性病毒攻击实验，综合评估抗体滴度、亚类组成、亲和力及Fc效应功能等指标。

关键实验方法概述

研究利用表达CCHFV Oman-98株糖蛋白的Vero-E6细胞系生产VRP疫苗，通过免疫荧光法（TCID₅₀）定量疫苗滴度。小鼠接种后，采用ELISA检测抗核蛋白（NP）IgG及其亚类（IgG1、IgG2c），尿素解离法分析抗体亲和力，并通过微球偶联-流式细胞术评估抗体依赖性补体沉积（ADCD）和细胞吞噬（ADCP）功能。病毒攻击实验使用抗IFNAR1单抗（MAR1-5A3）短暂免疫抑制小鼠后，皮下接种1×10² TCID₅₀的CCHFV IbAr10200株，监测14天内生存率与组织病毒载量（RT-qPCR检测）。

抗体应答持久性与质量提升

研究显示，单剂接种后抗NP IgG滴度在21-42天达峰，随后缓慢下降，但直至18个月仍显著高于基线水平；而双剂接种早期（21天至3个月）抗体滴度显著更高，且5-12个月内保持稳定。值得注意的是，尽管6-12个月时两组总IgG滴度相近，但加强接种显著提升了抗体亲和力（亲和指数35-50% vs 单剂10-26%）与Fc效应功能（ADCD/ADCP）。例如，单剂组效应功能在3个月后开始减弱，而双剂组直至6个月仍维持高水平，表明加强免疫可通过亲和力成熟增强抗体质量。

保护效力与病毒控制

病毒攻击实验证实，单剂疫苗接种在6个月内提供≥67%的保护率，但9、12、18个月时分别降至50%、46%和21%；相反，双剂接种在12个月内保护率始终≥75%（12个月时88%存活）。组织病毒载量分析进一步揭示，幸存小鼠的肝、脾等器官中病毒RNA显著减少或未被检测，且双剂接种幸存者的病毒控制能力更强（如12个月时脾脏载量更低）。此外，随着接种时间延长，幸存者肝脏病毒载量呈上升趋势，提示疫苗虽能预防致死性疾病，但对病毒复制的控制力随时间逐渐减弱。

结论与展望

本研究表明，CCHFV VRP疫苗可诱导持续18个月的体液免疫应答，且加强接种能显著延长保护期限并提升抗体质量。该平台通过聚焦非中和性抗NP抗体，规避了传统中和抗体（抗Gc/Gn）与保护力关联不一致的局限，为CCHFV疫苗开发提供了新方向。尽管细胞免疫（如T细胞应答）在VRP疫苗中的作用仍需深入探索，但当前数据充分支持其临床推进价值。在猴痘、埃博拉等病毒疫苗已证明长效保护可行的背景下，本研究为CCHFV这一高负担病原体的防控策略增添了关键证据，尤其适用于流行区长期免疫规划或应急储备。

综上，CCHFV VRP疫苗的持久性与加强免疫优势，为应对突发疫情和实现群体免疫奠定了实验基础，未来需进一步在非人灵长类模型中验证其跨物种保护潜力。