冷冻保存的器官捐献者骨髓在配型不匹配的异体移植中实现了良好的植入和嵌合现象

《Cytotherapy》：Cryopreserved Organ Donor Bone Marrow Achieves Robust Engraftment and Chimerism in Mismatched Allogeneic Transplantation

造血干细胞移植存在供体短缺问题，本研究通过器官捐献者骨髓制备符合GMP标准的冷冻骨髓库，成功实现3例急性髓系白血病患者的移植治疗，验证了其安全性和有效性。

　　本研究探讨了通过优化制造流程，建立一个基于器官捐献者来源的冷冻骨髓库，以提高异基因造血干细胞移植（alloHCT）的可行性和安全性。造血干细胞移植是治疗多种血液系统恶性肿瘤和非恶性疾病的重要手段，但传统的移植流程存在较大的操作差异，尤其是在冷冻保存方面。冷冻保存虽然能够延长产品的储存时间，便于移植，但目前仅在新鲜产品不可行时推荐使用。此外，不同采集中心的产品质量也存在显著差异。为了解决这些问题，研究团队建立了一个符合良好生产规范（GMP）的冷冻骨髓库，该库使用经同意的器官捐献者的椎体段进行处理，并且能够稳定地提供大量CD34+细胞，且冷冻后细胞存活率高，通过流式细胞术和集落形成单位（CFU）分析验证了每个批次的细胞活力。目前的长期稳定性研究显示，冷冻保存6年以上的细胞仍然保持较高的活力。此外，研究团队对三种高危急性髓系白血病（AML）患者进行了临床试验，他们接受了4/8人相容性HLA匹配的冷冻骨髓移植物，并结合了移植后环磷酰胺（PTCy）用于移植物抗宿主病（GVHD）的预防。所有患者都成功植入，并在移植后第15至20天实现了中性粒细胞恢复，第18至34天实现了血小板恢复，并在移植后第30天确认了完全供体嵌合体。两名患者出现II级急性GVHD，一名患者出现III级急性GVHD，但所有患者均对糖皮质激素有反应，并完全恢复。其中一名患者因与移植无关的呼吸衰竭在移植后第282天死亡。未观察到复发或慢性GVHD。这一来源于器官捐献者的冷冻骨髓库代表了一种新型的造血干细胞来源，可能为需要快速移植的患者提供一致、高质量的移植物。

在疫情大流行期间，冷冻保存在异基因造血干细胞移植中的应用凸显了其在应对物流挑战和提高患者安全方面的优势。然而，早期的临床结果并不一致，一项对CIBMTR数据库的分析显示，冷冻保存的移植物在某些情况下可能不如新鲜移植物。尽管如此，研究团队强调，通过GMP标准流程和制造环境优化，可以显著提高冷冻骨髓产品的质量和一致性。这些改进包括自动化处理、优化骨磨碎和骨髓提取步骤，以及采用更合适的冷冻保护剂配方和包装方式，以确保细胞在冷冻和解冻过程中的存活率和功能活性。

冷冻保存的流程包括几个关键步骤：冷冻保护剂的配方和包装、冷冻、储存和运输、以及解冻和验证。冷冻保护剂配方采用了5%的二甲基亚砜（DMSO），相比传统的10% DMSO浓度，可以减少细胞在解冻过程中的毒性，并降低DMSO对患者的暴露。冷冻过程中，使用了经过验证的被动冷却方法，确保在不同装载条件下都能实现一致的冷却速率。解冻过程则通过标准水浴和可编程干式解冻设备进行验证，确保解冻速度达到100°C/min以上。此外，研究团队还对冷冻保存的骨髓进行了长期稳定性研究，结果显示在冷冻保存6年以上的细胞仍然保持较高的活力。

为了确保冷冻骨髓产品的质量和一致性，研究团队实施了严格的质量控制（QC）措施。所有产品在冷冻前和解冻后都进行流式细胞术和CFU分析，以确认细胞活力和功能活性。这些QC措施确保了产品在临床使用前的安全性和有效性。此外，冷冻骨髓产品在制造过程中经过了详细的筛选和测试，确保符合相关标准。这种高质量的冷冻骨髓产品不仅提高了移植的成功率，还为那些无法找到合适活体供体的患者提供了重要的治疗选择。

在临床应用方面，研究团队对三种高危AML患者进行了试验，这些患者接受了冷冻骨髓移植物，并结合了PTCy进行GVHD预防。所有患者均实现了快速的植入，并在移植后第15至20天实现了中性粒细胞恢复，第18至34天实现了血小板恢复。此外，所有患者在移植后第30天确认了完全供体嵌合体。尽管有两名患者出现了II级急性GVHD，一名患者出现了III级急性GVHD，但所有患者均对糖皮质激素有反应，并完全恢复。这些结果表明，冷冻骨髓产品在临床应用中是安全且有效的。

研究团队还讨论了冷冻保存在异基因造血干细胞移植中的潜在优势。传统的异基因移植依赖于活体供体，但活体供体的获取受到多种因素的限制，包括供体的可获得性和伦理问题。相比之下，冷冻骨髓库可以提供更多的供体选择，并且在需要时可以快速提供移植物。此外，冷冻保存可以减少对新鲜供体的依赖，提高移植的灵活性和及时性。研究还指出，冷冻保存可能有助于减少GVHD的发生率，因为冷冻保存的骨髓含有较少的T细胞，从而降低了移植物抗宿主反应的风险。

总的来说，这项研究展示了冷冻骨髓作为一种新型造血干细胞来源在异基因移植中的潜力。通过优化制造流程和严格的质量控制，冷冻骨髓产品能够提供一致、高质量的移植物，从而提高移植的成功率和安全性。未来的研究将进一步验证冷冻骨髓的长期疗效和安全性，为更多患者提供治疗选择。