维蒂克斯高木（Vitex Altissima）树皮提取物及其分离出的生物活性成分的护肝特性评估：体外与体内研究方法

《European Journal of Medicinal Chemistry Reports》：Evaluation of the Hepatoprotective Properties of Vitex Altissima Bark Extracts and Isolated Bioactive: In-vitro and In-vivo approach

研究印度科org地区传统草药Vitex altissima树皮提取物的肝保护及抗氧化机制，通过体外HepG2细胞实验和体内Wistar大鼠模型，发现其乙醇提取物显著抑制CCl4诱导的氧化应激和炎症反应，并通过HPLC-MS/MS鉴定出活性成分Albafuran C。该化合物在剂量依赖性下提升SOD、CAT等抗氧化酶活性，降低MDA和iNOS表达，恢复肝细胞结构和功能，证实其通过NF-κB信号通路抑制炎症的机制。

　　### 解读：Vitex altissima的肝保护作用及其活性成分Albafuran C的潜在药用价值

#### 引言

肝脏是人体中仅次于大脑的重要器官，承担着多种关键的生理功能，包括代谢、解毒和蛋白质合成等。在全球范围内，肝脏疾病已成为一个严重威胁人类健康的公共卫生问题，每年导致超过两百万人死亡，其中每25人中就有1人因肝病而失去生命。当前，肝脏疾病是全球第十一大致死原因，但其实际死亡率可能被低估。这类疾病包括肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝病、肝硬化和肝癌等，这些疾病往往具有相似的临床表现和复杂的发病机制。

肝脏的正常功能依赖于其强大的自我修复能力，但随着环境污染物的增加和不健康生活方式的普及，肝脏损伤已成为普遍现象，迫切需要有效的治疗手段。目前，市场上已有多种合成药物用于治疗肝病，但这些药物常伴随副作用和长期效果不佳的问题，促使科学家和医学界更加关注天然药物的开发，尤其是来源于传统医学的植物提取物。其中，Vitex altissima作为一种具有传统药用价值的植物，在印度南部被广泛用于治疗与肝脏相关的疾病，如黄疸、肝损伤等。本研究旨在通过现代科学手段验证其肝保护机制，并探索其活性成分的药理作用。

#### 材料与方法

##### 植物材料

本研究使用的植物为Vitex altissima，采集于印度卡纳塔克邦的Coorg地区。采集后，将树皮清洗、阴干、粗粉碎并储存于密封容器中，以备后续提取使用。植物标本由当地植物学家Dr. Shivalingaiah认证，并存档于政府第一等级学院的标本库中。

##### 提取与分离

首先，将粗粉碎的树皮用乙醇进行连续搅拌提取，直至溶液变无色。提取物经过滤、压榨和减压蒸发后得到乙醇提取物，并干燥储存。随后，通过液液萃取法进一步将提取物分为氯仿和乙醇两个部分。氯仿部分用于去除油性残留，而乙醇部分则保留了更多的生物活性成分。

##### 药物成分分析

对提取物和分离后的组分进行了定性药用成分分析，以确定其是否含有生物活性物质。此外，还采用了薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）等方法进行进一步分析，以评估不同组分的纯度和生物活性。

##### 活性引导的抗氧化实验

为了评估提取物的抗氧化能力，本研究采用DPPH自由基清除实验和羟基自由基清除实验。DPPH是一种紫色的自由基，当与氢供体反应时会转化为无色的产物，通过测定吸光度的变化可以评估抗氧化活性。羟基自由基清除实验则通过Fenton反应产生自由基，再通过比色法测定其清除能力。实验结果显示，乙醇提取物在两种实验中均表现出较高的清除能力。

##### 肝细胞培养与细胞活力实验

本研究采用HepG2细胞作为肝细胞损伤模型。HepG2是一种广泛用于研究人类肝癌的细胞系，具有高度的代谢能力和对肝毒性物质的敏感性。通过MTT实验评估细胞活力，结果显示乙醇提取物在200 μg/ml浓度下对HepG2细胞无显著毒性，并表现出良好的细胞保护能力。

##### 抗氧化酶活性测定

为了进一步确认乙醇提取物的肝保护作用，本研究对细胞内的抗氧化酶（如超氧化物歧化酶SOD和过氧化氢酶CAT）进行了活性测定。结果显示，乙醇提取物显著提高了这些酶的活性，表明其具有增强细胞抗氧化能力的作用。

##### 细胞内ROS水平测定

通过DCFH-DA染色和流式细胞术，评估了细胞内活性氧（ROS）水平。结果显示，乙醇提取物显著降低了CCl4诱导的ROS水平，从而减轻了细胞损伤。

##### iNOS表达分析

诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在炎症反应中起重要作用，其表达水平升高会导致炎症加剧。通过流式细胞术评估iNOS的表达，发现乙醇提取物能够显著抑制iNOS的表达，表明其具有抗炎作用。

##### RNA和蛋白表达分析

通过实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot技术，进一步分析了与炎症相关的基因（如TNF-α和IL-6）和蛋白（如NF-κB）的表达水平。结果显示，乙醇提取物能够显著降低这些炎症因子的表达，表明其具有调控炎症信号通路的作用。

##### 动物实验

在动物实验中，选择了健康的成年雄性Wistar大鼠作为模型，以评估乙醇提取物及其活性成分的肝保护效果。通过CCl4诱导肝损伤，并观察不同剂量下乙醇提取物对肝功能指标（如ALT、AST、ALP、总胆红素和总蛋白）的影响。结果表明，乙醇提取物在不同剂量下均能有效改善这些指标。

##### 统计分析

通过Prism软件进行统计分析，采用单因素方差分析（ANOVA）和Tukey的后验检验比较不同组之间的差异。同时，使用未配对t检验评估两组间的显著性差异。

#### 结果

##### 药物成分分析

通过初步的药用成分分析，确认了Vitex altissima树皮提取物中存在多种生物活性物质，如黄酮类、生物碱、单宁酸、糖苷、萜类和碳水化合物。氯仿和乙醇组分中均检测到黄酮类和生物碱，但未检测到蛋白质和皂苷。

##### 抗氧化活性

乙醇提取物在DPPH和羟基自由基清除实验中表现出较高的抗氧化活性，其IC50值分别为188.2 μg/ml和80.67 μg/ml。相比之下，氯仿组分的活性较低，表明乙醇组分可能更富含抗氧化成分。

##### 细胞保护作用

在HepG2细胞模型中，乙醇提取物表现出良好的细胞保护能力，其在100 μg/ml浓度下显著提高了细胞活力，且能够有效抑制CCl4诱导的细胞死亡和自噬现象。这表明乙醇提取物具有较强的肝保护作用。

##### 活性成分分离与鉴定

通过HPTLC和pHPLC技术，从乙醇提取物中分离出三种化合物，其中ISO-1表现出最强的生物活性。通过FTIR、NMR和LC-MS/MS技术，进一步确认了ISO-1的化学结构，鉴定为Albafuran C。

##### Albafuran C的肝保护作用

Albafuran C在多种实验中表现出显著的肝保护作用。在细胞实验中，其在200 μg/ml浓度下显著提高了细胞活力，并有效抑制了CCl4诱导的ROS水平和iNOS表达。在动物实验中，Albafuran C在50和100 mg/kg剂量下显著改善了肝功能指标，如ALT、AST、ALP、总胆红素和总蛋白。此外，其对肝组织病理学变化也表现出显著的修复作用，如减少肝细胞坏死、炎症和脂肪沉积。

##### 抗炎作用

通过分析炎症相关基因（如TNF-α和IL-6）和蛋白（如NF-κB）的表达，发现Albafuran C能够显著降低这些炎症因子的表达，表明其具有良好的抗炎能力。这一结果进一步支持了其在肝病治疗中的潜力。

#### 讨论

肝脏在维持体内平衡和代谢过程中起着至关重要的作用。其复杂的防御机制，包括抗氧化系统和炎症控制，使其能够有效应对氧化应激和损伤。然而，随着环境污染和不健康生活方式的增加，肝脏损伤已成为全球范围内的重大健康问题，迫切需要有效的治疗手段。

本研究通过系统的方法，验证了Vitex altissima的肝保护潜力，并成功分离出具有显著生物活性的化合物Albafuran C。该化合物在多种实验中表现出良好的抗氧化和抗炎效果，特别是在CCl4诱导的肝损伤模型中，其对细胞活力的提高、ROS水平的降低以及炎症因子表达的抑制，均显示出其对肝脏的保护作用。此外，Albafuran C在动物实验中也表现出良好的肝功能改善效果，进一步支持了其作为天然肝保护剂的潜力。

在分子机制方面，Albafuran C通过抑制NF-κB信号通路的激活，减少炎症反应，从而保护肝脏免受损伤。这一机制与已知的其他天然抗氧化剂类似，表明其可能具有广泛的药理作用。

#### 结论

综上所述，本研究发现Vitex altissima的乙醇提取物及其活性成分Albafuran C具有显著的肝保护作用。其不仅在细胞实验中表现出良好的抗氧化和抗炎能力，还在动物模型中显示出对肝功能的显著改善。这些结果为进一步开发Albafuran C作为天然肝保护剂提供了科学依据，并为其在临床应用中的潜力奠定了基础。未来的研究应聚焦于其分子机制、药代动力学和长期安全性，以推动其在肝病治疗中的实际应用。