ROCK抑制剂Y27632与阿托伐他汀在Optineurin-E50K突变小鼠中的协同神经保护作用：通过抑制巩膜成纤维细胞的转分化实现

《Experimental Cell Research》：Synergistic neuroprotective effects of the ROCK inhibitor Y27632 and atorvastatin in Optineurin-E50K-mutant mice through inhibition of scleral fibroblast transdifferentiation

犬巴贝斯病早期与晚期感染通过重组BgTRAP蛋白建立IgM/IgG ELISA检测体系并验证其诊断价值。

　　犬巴贝斯虫病是一种由蜱虫传播的严重寄生虫病，近年来在全球范围内呈现出上升趋势，对宠物健康构成威胁。在印度南部，犬巴贝斯虫（*Babesia gibsoni*）感染是最常见的血浆寄生虫感染之一。然而，由于感染早期或晚期的寄生虫载量较低，甚至间歇性出现，使得犬巴贝斯虫病的诊断面临较大挑战。传统方法如显微镜检查需要专业知识，且在实际应用中存在一定的局限性。因此，开发更为便捷、快速、准确的诊断工具显得尤为重要。

本研究旨在通过基于重组巴贝斯虫相关粘附蛋白（rBgTRAP）的IgM/IgG酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，区分犬巴贝斯虫病的早期和晚期感染。研究中，通过基因克隆和表达技术，将*BgTRAP*基因的N端部分克隆至pET32a载体中，并在*Escherichia coli* BL21菌株中表达，最终获得重组蛋白。使用该重组抗原进行ELISA检测，结果显示IgM ELISA在130个样本中有73例（56.15%）呈阳性，IgG ELISA则有77例（59.23%）呈阳性。进一步通过聚合酶链反应（PCR）对*BgTRAP*基因进行检测，发现73.07%的样本为阳性。将ELISA结果与PCR结果进行比较，发现IgM ELISA的敏感性为36.54%，特异性为75.00%；IgG ELISA的敏感性为42.31%，特异性为71.88%。从整体准确性来看，IgM ELISA的准确性为51.19%，阳性预测值为70.4%，阴性预测值为42.1%；而IgG ELISA的准确性为53.57%，阳性预测值为71.0%，阴性预测值为43.4%。这些数据表明，尽管两种ELISA方法的诊断准确性尚属中等，但它们在区分早期和晚期感染方面具有一定的价值。

研究还发现，rBgTRAP抗原与常见的线虫寄生虫（如*Ancylostoma caninum*、*Dirofilaria immitis*、*D. repens*、*Spirometra* spp.、*Toxocara canis*）以及其他血浆寄生虫（如*Trypanosoma evansi*、*Babesia vogeli*、*Hepatozoon canis*、*Ehrlichia canis*）之间没有交叉反应，这表明该抗原具有较高的特异性。因此，该ELISA方法可以有效区分犬巴贝斯虫病的早期（IgM阳性）和晚期（IgG阳性）感染，为临床诊断提供了新的选择。

犬巴贝斯虫病的临床表现多样，包括发热、食欲不振、虚弱、嗜睡、腹泻、呕吐、抑郁、黄疸、脾肿大、淋巴结肿大、肝肿大、血小板减少以及再生性贫血等。这些症状在急性或慢性感染阶段均可出现，使得临床诊断变得复杂。感染的早期阶段，通常只有IgM抗体的产生，而恢复期或既往感染则表现为IgG抗体的阳性。因此，IgM抗体的检测有助于早期识别感染，而IgG抗体则可用于判断既往感染状态。然而，目前尚无专门用于区分早期和潜伏感染的免疫学检测方法，因此本研究具有重要的现实意义。

此外，研究中提到的*BgTRAP*蛋白是巴贝斯虫属寄生虫中的一种关键抗原，其在红细胞入侵、寄生虫生命周期中的其他关键过程（如寄生虫吞噬体膜的破裂和配子从红细胞中释放）中起着重要作用。*BgTRAP*蛋白具有高度保守性，且在多种巴贝斯虫中均存在，这使其成为开发诊断工具的理想候选抗原。以往的研究已表明，*BgTRAP*蛋白在犬巴贝斯虫病的诊断中具有较高的免疫优势，因此在本研究中，通过使用N端重组蛋白，进一步验证了其在早期和晚期感染诊断中的潜力。

在实际应用中，尽管PCR方法在灵敏度和特异性方面优于ELISA，但由于其需要昂贵的实验设备和复杂的操作流程，难以在野外或资源有限的环境中广泛使用。因此，开发一种简便、快速、经济的免疫学检测方法对于提高犬巴贝斯虫病的诊断效率具有重要意义。本研究中标准化的IgM ELISA方法，能够在不依赖PCR的情况下，为临床提供快速的诊断手段，尤其适用于早期感染的检测。而IgG ELISA则可用于判断既往感染或恢复期的状态。

值得注意的是，本研究的样本主要来自印度南部的几个州，包括泰米尔纳德邦、卡纳塔克邦、安得拉邦和喀拉拉邦，这些地区的*BgTRAP*基因阳性率较高，表明犬巴贝斯虫病在这些地区的流行情况较为严重。相比之下，印度北部的样本阳性率较低，这可能与地理环境、气候条件、宿主种类以及寄生虫传播媒介的分布有关。因此，本研究的结论主要适用于印度南部地区的犬巴贝斯虫病诊断，对于其他地区的应用可能需要进一步的验证。

研究中提到的伦理声明表明，所有实验均遵循印度政府关于动物实验的规范和指导原则，确保了实验的合法性和伦理性。同时，研究还涉及了数据的公开和资金来源的声明，显示了研究的透明性和科学性。作者们还指出，研究中部分参考文献未被引用，这可能是因为某些文献尚未发表或在本研究中未被采用，但并未影响研究结果的可信度。

综上所述，本研究通过基于重组*BgTRAP*蛋白的IgM和IgG ELISA方法，成功区分了犬巴贝斯虫病的早期和晚期感染。尽管两种ELISA方法的诊断准确性尚未达到理想水平，但它们在临床应用中仍具有较高的实用价值。特别是在资源有限的情况下，ELISA方法能够提供快速、简便的诊断手段，为犬巴贝斯虫病的防控提供了新的思路和工具。未来的研究可以进一步优化这些检测方法，提高其灵敏度和特异性，使其在更广泛的范围内得到应用。此外，结合分子生物学方法，如PCR，可以进一步提高诊断的准确性，为犬巴贝斯虫病的早期发现和及时治疗提供保障。