MCPyV的小T抗原可增强HPV16癌基因的表达，促进Ca Ski细胞的增殖，并降低5-氟尿嘧啶对宫颈癌细胞的凋亡作用

《Infectious Medicine》：MCPyV small T antigen enhances HPV16 oncogene expression, promotes Ca Ski cell proliferation, and reduces 5-fluorouracil-induced apoptosis in cervical cancer cells

宫颈癌治疗中5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药性与HPV16及MCPyV sT协同作用机制研究。通过转染sT蛋白至HPV16阳性Ca Ski细胞，发现sT显著降低5-FU诱导的凋亡率（IC50从3.52提升至4.21 μg/mL），并上调E5、E6/E7 mRNA表达3.96-4.05倍，同时增强Ki-67增殖标记阳性率。该研究首次揭示MCPyV sT通过激活HPV16致癌蛋白通路，协同抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡，为开发针对病毒协同作用的治疗策略提供依据。

　　宫颈癌是一种由人乳头瘤病毒（HR-HPV）长期感染引发的恶性肿瘤，其中约99%的病例与HR-HPV有关。HR-HPV的致癌性主要依赖于其编码的E6和E7等致癌蛋白，这些蛋白通过干扰宿主细胞的调控机制，影响细胞的增殖和凋亡过程。E6蛋白能够破坏p53的转录激活功能，从而削弱其对细胞生长的抑制作用；E7蛋白则通过结合pRb蛋白，阻断细胞周期的正常调控，促进细胞无限制增殖。此外，E5蛋白也被发现参与调控细胞增殖、分化和凋亡相关的关键通路，从而支持肿瘤细胞的生存和侵袭能力。这些病毒蛋白的协同作用，使得HR-HPV在宫颈癌的发生和发展中扮演着核心角色。

然而，近年来的研究发现，除了HR-HPV之外，另一种病毒—— Merkel细胞多瘤病毒（MCPyV）也可能在宫颈癌的进展中发挥作用。MCPyV属于多瘤病毒科，是一种在人类中被发现的新型致癌病毒。其基因组是一个约5400个碱基对的环状双链DNA分子，包含三个功能区域。在早期区域中，存在T抗原基因位点，编码LT抗原、sT抗原、57k T抗原以及来自LT开放阅读框的另一种蛋白产物。值得注意的是，LT、sT和57k T抗原在N端区域共享一段78个氨基酸的序列，这表明它们在功能上可能存在一定的相似性。尽管MCPyV主要与Merkel细胞癌（MCC）相关，但已有研究发现其DNA在某些宫颈肿瘤样本中也存在，提示它可能与宫颈癌的发病机制存在某种联系。

本研究聚焦于MCPyV的sT蛋白，探索其在宫颈癌细胞中是否能够增强对5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的细胞凋亡的抵抗性，并影响HPV16致癌蛋白的表达及细胞增殖能力。Ca Ski细胞是一种常用于研究HPV相关癌症的细胞系，其天然表达E5和E6/E7致癌蛋白。研究者通过基因克隆技术将MCPyV的sT基因插入到哺乳动物表达载体中，并通过转染实验将该基因导入Ca Ski细胞。转染后，通过Western blot技术确认了sT蛋白的表达，同时使用MTT法评估了5-FU对细胞毒性的效果。此外，通过RT-qPCR检测了HPV16 E5和E6/E7基因的表达水平，而通过Ki-67免疫染色和Annexin V/PI流式细胞术评估了细胞增殖和凋亡情况。

研究结果显示，MCPyV sT蛋白的表达显著提高了Ca Ski细胞的存活率，增加了5-FU的半数抑制浓度（IC50），并显著减少了5-FU诱导的细胞凋亡。这表明sT蛋白可能通过某种机制干扰5-FU的细胞毒性作用。同时，sT蛋白还显著提高了HPV16的E5和E6/E7 mRNA水平，进一步支持其在增强HPV致癌活性方面的潜在作用。此外，Ki-67免疫染色结果显示，sT蛋白的表达与细胞增殖的增强密切相关，表明它可能通过促进细胞周期进程，提高宫颈癌细胞的增殖能力。

这些结果提示，MCPyV的sT蛋白与HPV16的致癌蛋白之间可能存在协同作用，共同促进宫颈癌细胞的存活和增殖。这种协同效应可能通过多种机制实现，包括对p53蛋白的干扰。p53是一种重要的肿瘤抑制蛋白，其功能受损会显著降低细胞对DNA损伤的反应能力，从而增强细胞对化疗药物的耐受性。尽管MCPyV的sT蛋白并不直接靶向p53，但它可以通过调节下游基因（如MDM2和LSD1）来间接影响p53的稳定性与功能。MDM2基因的表达可以促进p53的蛋白降解，而LSD1则在维持MCC细胞的增殖能力方面起着关键作用。这些发现表明，MCPyV sT蛋白可能通过影响p53相关的信号通路，进一步加剧细胞对化疗药物的抵抗。

此外，研究还发现，sT蛋白能够增强细胞的增殖能力，即使在5-FU存在的情况下，其作用依然显著。这可能与sT蛋白促进细胞失去接触抑制、实现锚定无关生长以及促进细胞在低血清条件下增殖的能力有关。这些特性是癌症细胞增殖和扩散的重要标志。因此，MCPyV sT蛋白可能通过增强细胞的增殖能力，进一步促进宫颈癌的发展。

本研究的结果还表明，MCPyV sT蛋白与HPV16致癌蛋白的协同作用可能导致了对5-FU的耐药性增强。这可能与多种机制有关，包括促进细胞增殖、干扰细胞凋亡过程以及改变细胞代谢。例如，HPV16的E6和E7蛋白已被证实能够增强糖酵解，这是一种支持癌细胞生存的代谢方式，同时也会导致对化疗药物的抵抗。sT蛋白的表达可能通过增强这些致癌蛋白的活性，进一步降低细胞对5-FU的敏感性。

值得注意的是，尽管本研究提供了初步证据，但仍然存在一些局限性。首先，实验仅在单一的宫颈癌细胞系（Ca Ski）中进行，这可能限制了研究结果的普遍适用性。其次，尽管观察到了mRNA表达、细胞凋亡和增殖的变化，但并未对相关下游蛋白（如MDM2、LSD1和p53）进行更深入的分析，这可能影响对具体机制的理解。此外，本研究未包括功能性的基因敲低实验，如使用siRNA技术降低sT蛋白的表达，以进一步验证其作用的因果关系。最后，研究主要依赖于体外实验，未来需要通过体内模型（如异种移植或转基因小鼠模型）来评估MCPyV sT蛋白对宫颈癌治疗效果的影响。

综上所述，本研究揭示了MCPyV sT蛋白与HPV16致癌蛋白之间的潜在协同作用，这可能在促进宫颈癌细胞的增殖和抑制其对5-FU的敏感性方面发挥重要作用。这些发现不仅加深了我们对病毒相关癌症分子机制的理解，也为开发针对这类癌症的新型治疗策略提供了理论依据。未来的研究应进一步探索这两种病毒蛋白之间的相互作用，特别是在体内环境中的表现，并结合更全面的分子机制分析，以期为临床治疗提供更具体的指导。