接种剂量与途径对EHDV-8在实验感染牛体内分布及免疫反应的影响研究

《Veterinary Research》：Influence of inoculation dose and route on EHDV-8 distribution and the induced immune response in experimentally infected cattle

本研究针对新发EHDV-8毒株在牛体内的感染动态开展实验研究，通过比较不同接种剂量（106.2 TCID50/动物和105.2 TCID50/动物）和途径（皮内/皮下）对病毒血症、组织分布和免疫反应的影响，发现接种方式对病毒传播和免疫应答影响有限，但首次揭示临床发病个体存在细胞免疫应答延迟现象，为制定监测策略和疫苗评价提供重要依据。

　　

2022年秋季，一种名为流行性出血病病毒血清8型（EHDV-8）的虫媒病毒首次在欧洲意大利被发现，随后迅速蔓延至西班牙、葡萄牙和法国，给畜牧业带来严重经济损失。这种通过库蠓传播的病毒主要感染反刍动物，虽然对白尾鹿具有高致死性，但在牛群中长期以来被认为多呈隐性感染。然而近年来情况发生显著变化——EHDV-6和EHDV-7等血清型在牛群中引发的临床症状日益增多，而新出现的EHDV-8毒株更显示出独特的基因特征，与1982年澳大利亚发现的原始毒株基因同源性仅为77%，导致基于历史毒株的科学知识无法直接应用于当前疫情。

更令人担忧的是，欧洲流行的EHDV-8毒株在田间表现出前所未有的临床症状，包括发热、口腔黏膜糜烂、呼吸困难、舌部水肿等，甚至导致死亡病例。然而，关于这一新毒株在牛体内的感染规律、组织分布特征和免疫应答机制等基础科学问题仍属空白。这严重制约了疫情监测、诊断和防控策略的制定。为此，De Leeuw等研究人员在《Veterinary Research》发表了实验感染研究，系统评估了接种剂量和途径对EHDV-8在牛体内分布及诱导免疫反应的影响。

研究团队采用西班牙分离的EHDV-8毒株（SPA 2022/LCV_03），将12头牛随机分为四组：皮内高剂量组（10^6.2 TCID₅₀/动物）、皮下高剂量组（10^6.2 TCID₅₀/动物）、皮内中剂量组（10^5.2 TCID₅₀/动物）以及模拟接种对照组。研究通过每日临床监测、定期采样（血液、拭子、皮肤活检）和剖检组织收集，采用RT-qPCR检测病毒RNA，病毒分离评估感染性病毒，ELISA和病毒中和试验（VNT）分析体液免疫，干扰素-γ释放试验（IGRA）评估细胞免疫应答。

临床观察结果

发热是感染后最一致的临床表现。高剂量组（皮内和皮下）在8-9天感染后（dpi）出现明显发热峰，体温达39.7-40.1°C，发热持续时间显著长于中剂量组。唯一出现临床症状的动物（皮下高剂量组EHDV04）从10 dpi开始表现倦怠、淋巴结肿大和结膜炎，剖检时发现肾脏表面有瘀点病变。

病毒血症动态

所有感染牛在3 dpi均检测到病毒RNA，病毒血症在7-10 dpi达到峰值（Ct值25-32），持续至研究结束（21 dpi）。感染性病毒分离显示，病毒传播窗口期至13 dpi，而RNA血症持续时间更长。接种剂量和途径对病毒血症特征无显著影响。

组织病毒分布

剖检组织病毒载量分析显示，淋巴结（平均Ct值33.99）和脾脏（平均Ct值31.17）病毒载量最高，显著高于肌肉、皮肤和脑组织。临床症状个体肾脏呈现异常高病毒载量（Ct=20），提示肾脏可能是严重感染的靶器官。

免疫应答特征

所有感染牛在10 dpi均产生特异性抗体，中和抗体滴度从13 dpi达到≥2560。细胞免疫检测显示，非临床感染牛在5-7 dpi出现干扰素-γ（IFN-γ）峰值，而临床症状个体（EHDV04）应答延迟至17 dpi，提示细胞免疫时序异常可能与临床发病相关。

本研究首次系统阐明了EHDV-8在欧洲牛群中的感染规律：病毒血症早发且持久，脾脏和淋巴结为病毒主要富集部位，抗体应答快速而强烈。更重要的是，研究发现接种剂量和途径对感染进程影响有限，但揭示了细胞免疫应答时序与临床结局的潜在关联。这些发现为疫情监测（血液、脾脏和淋巴结为最佳诊断样本）和疫苗评价提供了关键实验依据，也为理解EHDV-8致病机制提供了新视角。随着EHDV-8疫苗在欧洲条件批准使用，本研究建立的感染模型将为疫苗免疫效果评价提供重要技术平台。