恩曲他滨降解产物的分离、鉴定及理论药代动力学（ADME）研究

《Journal of the Indian Chemical Society》：Separation, Identification and Theoretical ADME studies of Emtricitabine degradation adducts

Emtricitabine的稳定性指示HPLC方法开发及降解产物分析。通过优化色谱条件（HyperChrome C18柱，流动相为7:93体积比的乙腈-0.1%正磷酸）建立方法，符合ICH指南的线性（R2=0.9987）、精密度、准确性和稳健性。应力试验涵盖氧化、热、光、酸碱及光催化-碱性条件，LC-MS确认降解产物分子量，结合pKCSM和ADMET Lab 3.0评估ADME特性。

　　

哈迪克·L·瓦鲁（Hardik L. Varu）|纳瓦尔·P·卡普里亚（Naval P. Kapuriya）|阿图尔·H·巴波德拉（Atul H. Bapodra）|姆鲁纳尔·A·安巴萨纳（Mrunal A. Ambasana）

印度古吉拉特邦朱纳加德（Junagadh）362001，苏巴什大学（Dr. Subhash University）理学院化学系

摘要

本研究包括了对埃姆特里西替宾（Emtricitabine）降解产物的分离、鉴定以及理论ADME（吸收、分布、代谢和排泄）研究，这些研究为开发一种简单、准确、精确且能指示稳定性的分析方法提供了依据。该方法按照ICH（国际药典协调会）标准建立并经过验证，成功应用于应力降解测试。色谱柱采用250 × 4.6毫米、5.0微米的HyperChrome C₁₈柱作为固定相，流动相为乙腈与0.1%正磷酸（体积比7:93）。流动相流速设定为1.0毫升/分钟，药物及其降解产物分别通过PDA检测器在289纳米和210纳米波长下进行吸收度检测。色谱图显示，埃姆特里西替宾的Rf值为3.35 ± 0.03，实际浓度范围为40–100微克/毫升。校准曲线的线性回归分析结果显示R²值为0.9987，表明数据具有很强的线性关系。该方法在线性、准确性、精确度、稳健性、检测限和定量限方面均符合ICH要求。此外，还使用新开发的RAPI工具对其性能进行了评估。实验中考察了药物在氧化、热解、光解、碱性和光催化-碱性条件下的降解行为，并大规模制备了降解产物，通过LC-MS进行了分析。根据分子量确定了降解产物的结构。同时，还利用pKCSM和ADMET Lab 3.0网站进行了理论ADME研究。

引言

埃姆特里西替宾的化学结构如图1所示，其分子式为C₈H₁₀FN₃O₃S，分子量为247.24克/摩尔。该物质为白色至微白色结晶或无定形固体，无气味。作为生物制药分类系统（BCS）中的I类物质，它具有高溶解度、高渗透性和完全吸收性[1]。

埃姆特里西替宾是一种口服核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI），对人类免疫缺陷病毒（HIV）和乙型肝炎病毒（HBV）具有抗病毒活性。2006年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准其用于治疗HIV，但未批准用于治疗HBV[2]。该药物属于B类药品，无致畸作用或增加先天性异常的风险[3]。此外，对于同时感染HIV和丙型肝炎病毒（HCV）的患者，使用埃姆特里西替宾是安全的，因为它与HCV药物的相互作用很小[4]。通常，埃姆特里西替宾与替诺福韦（tenofovir）、依非韦伦（efavirenz）和拉米夫定（lamivudine）联合使用，作为HIV治疗的多种药物方案的一部分[5, 6]。

埃姆特里西替宾含有一个五元环结构的氧杂硫环（oxathiolane），该结构易发生亲核降解。这种不稳定性源于环内的结构缺陷，可能通过自由基重组机制导致分解。因此，详细研究其降解过程对于了解其在各种条件下的稳定性至关重要，以确保其在药物制剂中的有效性和安全性。本研究旨在阐明其降解途径，从而提高药物的稳定性和储存性能。

文献调查显示，已有大量关于埃姆特里西替宾的研究，包括单独使用及与替诺福韦、依非韦伦和拉米夫定联合使用的效果，主要采用HPLC方法[12–17]；部分研究还使用了UV-Vis光谱法[7–11]和HPTLC[18]。尽管有一些研究开发并验证了埃姆特里西替宾的稳定性检测方法[13–16]，但针对其降解产物的鉴定及理论ADME研究的开展相对较少。

实验方法

化学品与试剂

埃姆特里西替宾（纯度99.96%）由Anlon Healthcare Pvt. Ltd.（古吉拉特邦拉杰科特）提供；所有分析级溶剂均从Loba Chemie Pvt. Ltd.（印度孟买）采购；HPLC级正磷酸购自Sigma Chemie Pvt. Ltd.（印度孟买）；高纯度去离子水则通过Merck Milli-Q-Direct-Q3水纯化系统制备。

仪器

本研究采用了全自动液相色谱系统，并连接了分流收集器。

实验条件优化

通过系统优化色谱条件，建立了用于识别和定量埃姆特里西替宾及其降解产物的方法。评估了不同比例的流动相组成、pH值和流速，以确定最佳方案。初步试验发现，用正磷酸和甲醇酸化的流动相得到的色谱峰形较差；随后通过调整成分改进了该方法。

结论

本研究开发了一种用于检测埃姆特里西替宾稳定性的液相色谱方法。该方法经过ICH标准验证，表现出良好的线性、准确性和精确度，适用于其分析目的。在成功建立定量方法后，进一步对其进行了应力降解研究。

根据埃姆特里西替宾的分子结构，碱性条件对其稳定性有显著影响。

作者贡献声明

阿图尔·H·巴波德拉（Atul H. Bapodra）：负责数据可视化及资源准备。哈迪克·L·瓦鲁（Hardik L. Varu）：撰写初稿、方法验证及实验设计。纳瓦尔·P·卡普里亚（Naval P. Kapuriya）：方法学设计及概念框架。姆鲁纳尔·A·安巴萨纳（Mrunal A. Ambasana）：文本修订与编辑、项目监督及整体规划。

利益冲突声明

作者不存在可能影响研究结果的个人、财务或其他利益冲突。

致谢

作者衷心感谢朱纳加德Bhakta Kavi Narsinh Mehta大学化学与法医学系提供的研究设施和仪器支持。哈迪克·L·瓦鲁同时感谢古吉拉特邦政府教育部门提供的SHODH奖学金，这对他们的研究工作起到了重要支持作用。