综述：神经退行性疾病生物标志物检测中的并行性问题：隐藏的错误与不当行为的风险

《Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences》：Parallelism in neurodegenerative biomarker tests: hidden errors and the risk of misconduct

本文系统回顾了神经退行性疾病生物标志物体液检测中分析平行性的证据，评估了其范围、重复性和报告质量。纳入44项研究，仅19项提供足够数据生成49个部分平行性 plots，其中仅7个（14%）显示部分平行性，通常局限于3个稀释倍数的狭窄范围。高偏倚风险存在于使用人工样本或不同稀释缓冲液的研究中。结论强调严格遵循验证指南的重要性，包括透明报告稀释协议和样本类型，以确保临床和科研应用的可比性。

　　神经退行性疾病的生物标志物是诊断和监测疾病进展的重要工具。这些生物标志物的准确量化依赖于检测方法的有效性，特别是稀释的生物样本与标准曲线之间的平行性。如果平行性不足，可能会导致浓度估计出现偏差，从而影响临床和研究的应用。本文系统回顾了在体液（如血清、血浆、脑脊液）中用于神经退行性疾病生物标志物检测的分析平行性证据，并评估了部分平行性的程度、可重复性和报告质量。该系统回顾已在PROSPERO注册（编号CRD42024568766），并遵循PRISMA指南进行。研究包括2010年12月至2024年7月期间发表的文献，且不设语言限制。所有研究都需包含可用于评估连续稀释和标准曲线平行性的数据。

通过系统回顾，我们发现尽管存在多种生物标志物检测方法，但大部分检测方法在不同稀释步骤下表现出偏差，这种偏差可能会影响对生物标志物水平的判断。例如，某些检测在稀释时出现浓度升高或降低，这可能与蛋白质聚集有关，而蛋白质聚集是许多神经退行性疾病的一个显著特征。这种现象不仅限于单一生物标志物，而是广泛存在于多个检测中，说明了平行性问题的重要性。此外，一些研究使用了人工或添加样本，而不是真实患者样本，这可能影响检测结果的代表性，同时，一些研究中稀释缓冲液不一致，进一步降低了结果的可比性。

我们通过生成标准化的平行性图来评估每个研究中的平行性。这些图表不仅提供了视觉上的对比，还帮助我们做出是否观察到部分平行性的判断。结果显示，仅有7张图表（占所有部分平行性图的14%）明确展示了部分平行性，而其余大多数图表显示出与标准曲线不平行的情况。这种不平行性通常仅限于非常狭窄的稀释范围，大约三个对数稀释步骤。这表明当前的检测方法在广泛稀释范围内可能无法保持一致的浓度估计，进而影响其在临床应用中的可靠性。

文章进一步探讨了部分平行性评估中的方法学挑战。例如，使用人工样本可能会导致与真实样本不同的结果，因为这些样本可能在结构或功能上与内源性生物标志物不同。此外，稀释过程中可能存在的其他因素，如缓冲液的不一致性或稀释步骤的不规范，都可能影响检测的准确性。因此，为了确保检测的可靠性，需要在方法学设计中更加严格地遵循标准化流程，并在报告中充分披露所有相关步骤和参数。

此外，文章指出部分平行性在某些生物标志物中表现出不同的特征。例如，某些检测在高浓度范围内显示出部分平行性，而在低浓度范围内则存在偏差。这种现象可能与生物标志物的性质有关，如某些蛋白质在高浓度时更容易聚集，从而影响检测结果。同时，文章还强调了在生物标志物检测中，样本的预处理和稀释步骤对于评估平行性的重要性。为了减少偏差，需要确保所有样本和标准曲线使用相同的缓冲液进行稀释，并且实验过程中应保持盲法操作，以避免主观因素对结果的影响。

本文还讨论了平行性问题在临床研究和监管审批中的实际影响。例如，在使用神经丝蛋白（如NfL和NfH）进行研究时，如果未充分验证平行性，可能导致对疾病严重程度的错误判断。这种错误可能会影响治疗决策，甚至对临床试验的设计和结果解读产生重大影响。因此，确保平行性测试的严谨性和透明度对于临床研究和监管审批至关重要。

综上所述，本文系统回顾了神经退行性疾病生物标志物检测中平行性测试的现状，发现尽管部分检测方法在某些稀释范围内能够保持部分平行性，但整体来看，平行性问题仍然普遍存在。这表明在生物标志物检测领域，仍需进一步改进方法学设计，加强标准化流程，并提高报告的透明度。只有通过严格的平行性测试，才能确保生物标志物检测结果的准确性和可靠性，从而支持临床决策和科学研究。