Circ_0005372 通过靶向 miR-153-3p/ITGB3 轴来激活 PI3K/AKT 信号通路，从而促进儿童先天性心脏病和肺动脉高压的发生与发展

《Cardiovascular Pathology》：Circ_0005372 targets the miR-153-3p/ITGB3 axis to stimulate the PI3K/AKT signaling pathway to facilitate the occurrence and development of congenital heart disease and pulmonary arterial hypertension in children

先天性心脏病相关肺动脉高压的circ_0005372/miR-153-3p/ITGB3调控机制研究

　　本研究聚焦于先天性心脏病（CHD）相关的肺动脉高压（PAH）这一严重并发症，旨在揭示其发生机制并探索潜在的治疗靶点。CHD是新生儿中最常见且发病率最高的先天畸形之一，其对患者生命安全构成重大威胁。肺动脉高压作为CHD最严重的并发症之一，不仅显著增加了患者的死亡率，还可能引发右心衰竭等致命后果。因此，深入了解CHD相关PAH的分子机制，对于开发有效的治疗策略具有重要意义。

研究团队通过收集27对健康新生儿、CHD患者以及PAH-CHD患者的血浆样本，利用实时定量PCR（RT-qPCR）和Western blot技术检测了circ_0005372、miR-153-3p和ITGB3的表达水平。结果显示，在PAH-CHD患者的血浆样本中，circ_0005372的表达水平显著高于健康对照组和CHD患者。此外，在模拟缺氧环境下的肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）中，circ_0005372的表达也呈现出显著升高趋势。这表明circ_0005372可能在PAH-CHD的病理过程中发挥重要作用。

进一步实验表明，circ_0005372的表达抑制可显著降低HPASMC的增殖、迁移和侵袭能力。这提示circ_0005372可能通过调控细胞行为，参与PAH-CHD的发病机制。此外，研究团队通过RNA免疫共沉淀（RIP）、pull down实验以及双荧光素酶报告基因实验，验证了circ_0005372与miR-153-3p之间存在靶向关系。结果显示，circ_0005372能够通过结合miR-153-3p，减少其对目标基因的抑制作用。而miR-153-3p则被证实能够负向调控ITGB3的表达，这说明circ_0005372可能通过调控miR-153-3p，进而影响ITGB3的表达水平。

值得注意的是，当miR-153-3p被抑制时，circ_0005372对HPASMC的抑制作用被逆转，这表明miR-153-3p在其中起到了桥梁作用。此外，ITGB3的过表达则能够抵消miR-153-3p在缺氧条件下对HPASMC的抑制效果。这一系列实验结果提示，circ_0005372可能通过调控miR-153-3p/ITGB3轴，进而影响PI3K/AKT信号通路的活性，从而促进HPASMC的异常增殖、迁移和侵袭行为，加剧PAH-CHD的病情发展。

在临床背景方面，CHD的形成通常与胎儿期心血管系统的异常发育有关，同时可能伴随着出生后某些组织未能正常退化。遗传和环境因素在CHD的发生中起着关键作用，而PAH作为CHD最危险的并发症之一，显著提高了患者的死亡风险。目前，对于PAH-CHD的治疗仍存在诸多挑战，尤其是在手术耐受性和抗感染能力方面，患者往往表现出较差的临床表现。因此，寻找新的生物标志物和治疗靶点成为研究的重点。

近年来，环状RNA（circRNA）作为一种新型的非编码RNA，因其独特的闭合环状结构和较高的稳定性，引起了广泛关注。与线性RNA相比，circRNA不易被RNA酶降解，且在细胞内具有较长的半衰期，这使其在疾病调控中具有潜在优势。研究表明，circRNA可以通过与microRNA（miRNA）结合，发挥“海绵”作用，从而减轻miRNA对目标基因的抑制效果。这一机制使得circRNA在多种疾病的调控中展现出重要功能，包括心血管疾病。

在本研究中，通过分析PAH-CHD患者的血浆样本，发现circ_0005372的表达水平显著升高，这与临床观察中的异常病理变化相吻合。同时，在缺氧条件下培养的HPASMC中，circ_0005372的表达同样增加，进一步支持其在PAH-CHD中的潜在作用。研究团队还发现，circ_0005372的表达水平与miR-153-3p之间存在负相关关系，表明circ_0005372可能通过结合miR-153-3p，调控其对ITGB3的抑制作用。

ITGB3（整合素β3）是一种重要的细胞表面受体，广泛参与细胞粘附、迁移和侵袭等过程。在PAH-CHD的病理背景下，ITGB3的异常表达可能与肺动脉平滑肌细胞的过度增殖和迁移有关。通过实验验证，miR-153-3p能够显著抑制ITGB3的表达，而circ_0005372则通过结合miR-153-3p，削弱了这种抑制作用。这一发现为理解circ_0005372在PAH-CHD中的作用机制提供了新的视角。

此外，研究还表明，circ_0005372可能通过调控PI3K/AKT信号通路，进一步影响HPASMC的功能。PI3K/AKT通路是细胞增殖、迁移和存活的重要调控因子，其异常激活与多种疾病的发生发展密切相关。在本研究中，circ_0005372的表达抑制不仅影响了HPASMC的增殖能力，还显著降低了其迁移和侵袭水平，这可能与PI3K/AKT通路的活性变化有关。因此，circ_0005372可能通过这一通路，促进肺动脉平滑肌细胞的异常行为，进而加剧肺动脉高压的发展。

在实验方法上，研究团队采用了多种技术手段，包括RT-qPCR、Western blot、MTT和EdU实验、划痕实验和Transwell实验等，以全面评估circ_0005372对HPASMC功能的影响。这些实验不仅验证了circ_0005372的表达水平变化，还进一步揭示了其在细胞增殖、迁移和侵袭中的具体作用。同时，通过RIP、pull down和双荧光素酶报告基因实验，研究团队明确了circ_0005372与miR-153-3p以及ITGB3之间的相互作用，为后续的机制研究奠定了基础。

研究的结论指出，circ_0005372通过调控miR-153-3p/ITGB3轴，激活PI3K/AKT信号通路，从而促进HPASMC的异常增殖、迁移和侵袭，进而加速PAH-CHD的病情恶化。这一发现不仅揭示了circ_0005372在PAH-CHD中的关键作用，还为相关疾病的治疗提供了新的思路。未来，针对circ_0005372及其调控网络的研究，有望为PAH-CHD的精准诊断和个性化治疗提供重要依据。

在数据处理和统计分析方面，研究团队确保了实验的可重复性和数据的可靠性。所有实验均至少重复三次，采用GraphPad Prism 7软件进行数据分析，结果以均值±标准差（mean ± SD）的形式呈现。通过单因素方差分析（one-way ANOVA）或t检验方法，比较了不同组之间的差异。统计学显著性定义为P值小于0.05，这一标准确保了研究结果的科学性和可信度。

本研究的伦理审查和参与者知情同意均符合相关规范，所有样本均来自伦理委员会批准的项目，并获得了参与者的书面知情同意。此外，研究团队也明确了数据的可用性，表示相关数据可在合理请求下从通讯作者处获取，这为后续研究提供了数据支持和合作机会。

综上所述，circ_0005372在PAH-CHD的病理过程中扮演着重要角色。其通过调控miR-153-3p和ITGB3，影响PI3K/AKT信号通路的活性，进而促进HPASMC的异常行为，加剧肺动脉高压的发展。这一研究不仅加深了我们对PAH-CHD发病机制的理解，还为寻找新的治疗靶点提供了理论依据。未来，针对这一调控网络的进一步研究，可能有助于开发更有效的治疗策略，改善PAH-CHD患者的预后。