Sulodexide（苏洛德昔德）能够改善腺嘌呤诱导的肾损伤大鼠的肾间质纤维化

《European Journal of Pharmacology》：Sulodexide can ameliorates renal interstitial fibrosis in adenine-induced kidney injury rats

肾纤维化进展的机制及硫普罗宁干预效果研究。通过腺嘌呤诱导大鼠肾损伤模型，观察到肾纤维化标志物α-SMA和FN表达上调，Wnt/β-catenin通路激活。硫普罗宁干预后显著改善肾功能指标，降低纤维化标志物表达，抑制Wnt3a和β-catenin通路。

　　肾纤维化是慢性肾脏病（CKD）进展至终末期肾病（ESRD）的常见途径。随着疾病的发展，肾组织中会出现异常的细胞外基质（ECM）积累，这不仅会导致组织瘢痕形成，还可能破坏器官结构，最终引发肾功能衰竭。为了更好地理解和治疗这一病理过程，科学家们一直在探索新的药物干预手段。本研究旨在评估一种名为“Sulodexide”（SDX）的药物在腺嘌呤诱导肾损伤模型中的治疗效果及其潜在的分子机制。

### 肾纤维化的病理机制

肾纤维化的核心在于ECM的过度沉积，其中包括胶原蛋白I、III和IV、纤维连接蛋白（FN）以及糖胺聚糖（GAG）。这些成分的异常积累会导致肾组织结构的破坏，从而影响其正常功能。在肾纤维化过程中，受损的肾小管和浸润的炎症细胞会释放促纤维化因子，这些因子通过旁分泌或自分泌机制作用于多种成纤维细胞前体，最终引发成纤维细胞的激活。成纤维细胞的激活不仅导致其表达多种ECM蛋白，还促使胶原蛋白和蛋白聚糖（如纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Tenascin）的大量合成。这一过程被认为是肾纤维化发生的重要机制之一。

Wnt/β-catenin信号通路在肾纤维化的发展中也扮演了关键角色。Wnt蛋白是一类高度保守的分泌信号分子，参与肾小管的形成和肾脏发育。在正常成人肾脏中，Wnt/β-catenin信号通路处于静默状态，但在肾损伤后会被重新激活。Wnt蛋白通过与Frizzled（Fzd）受体以及其核心受体LDLR-related protein 5/6相互作用，传递其信号。当Wnt蛋白结合到这些受体上时，会引发一系列下游信号事件，导致β-catenin去磷酸化并稳定。稳定的β-catenin可以调控一系列下游基因的表达，这些基因与基质合成和纤维化密切相关，例如Snail1、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、纤维连接蛋白、成纤维细胞特异性蛋白1和基质金属蛋白酶-7。研究发现，Wnt信号通路不仅参与成纤维细胞的激活，还与上皮-间质转化（EMT）过程有关。EMT是肾纤维化中的一个关键事件，即肾小管上皮细胞转变为间质细胞，从而促进纤维化的发生。阻断Wnt信号通路可以显著减轻肾纤维化，因此，探索能够调节这一通路的药物成为治疗肾纤维化的重要方向。

### Sulodexide的药理特性

Sulodexide是一种从猪黏膜中提取的糖胺聚糖，主要由80%的低分子量肝素（LMWH）和20%的肝素硫酸盐组成。它具有抗炎和抗凝血的作用，已被广泛应用于临床治疗。研究表明，Sulodexide在糖尿病肾病患者中可能有助于改善蛋白尿，因为它能够恢复视网膜和舌下微血管中糖萼的基线大小，并降低升高的跨毛细血管白蛋白排泄率（AER）。这些结果表明，Sulodexide对肾脏具有一定的保护作用。此外，Sulodexide已被证实可以抑制肝纤维化过程中肝窦内皮细胞（LSECs）的内皮-间质转化（EndoMT）。EndoMT可以由Wnt蛋白诱导，而Sulodexide可能通过影响Wnt信号通路来减轻肾纤维化。然而，其在肾损伤中的具体作用机制尚未完全阐明。

### 实验设计与方法

为了验证Sulodexide在肾纤维化中的作用，本研究采用腺嘌呤诱导的肾损伤模型进行实验。实验选取了30只健康的成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重在250-300克之间，由济南鹏越实验动物繁育公司提供。这些大鼠被随机分为三组：对照组、肾损伤组（KI组）和Sulodexide治疗组（KI+SDX组）。对照组的大鼠接受正常饮食，而KI组的大鼠则被喂食0.75%的腺嘌呤饮食4周，并在接下来的8周内接受0.9%的生理盐水腹腔注射。KI+SDX组的大鼠则在同样的时间框架内接受0.75%的腺嘌呤饮食，并同时接受15 mg/kg/day的Sulodexide腹腔注射。实验结束后，收集大鼠的血液和肾组织样本，进行生化指标分析和病理染色，以评估肾损伤和纤维化情况。此外，采用免疫组织化学和Western blot技术检测与纤维化相关的蛋白和信号通路，以进一步探讨Sulodexide的分子机制。

### 实验结果

与对照组相比，肾损伤组的大鼠在实验结束时表现出更高的血肌酐和尿素氮水平，同时总蛋白水平降低，肾损伤程度明显加重。在免疫组织化学和Western blot分析中，肾损伤组中α-SMA（平滑肌肌动蛋白）和FN（纤维连接蛋白）的表达显著升高，且Wnt/β-catenin信号通路中的Wnt3a和β-catenin的表达也显著增加（p < 0.01）。这些结果表明，肾损伤不仅导致了肾组织的结构破坏，还激活了Wnt/β-catenin信号通路，从而促进了纤维化的发生。

在Sulodexide治疗后，肾损伤组的生化指标和病理表现得到了显著改善。α-SMA和FN的表达水平显著降低，同时Wnt3a和β-catenin的表达也明显减少（p < 0.01和p < 0.05）。这些结果提示，Sulodexide可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来减轻肾纤维化，从而改善肾功能。此外，Sulodexide的治疗还表现出对肾组织结构的保护作用，这可能与其抗炎和抗凝血的特性有关。

### 讨论

肾纤维化是慢性肾脏病进展至终末期肾病的最终共同通路。其核心机制是ECM的异常沉积，而ECM的过度积累会导致肾组织的瘢痕形成，最终破坏器官结构并导致肾功能衰竭。在腺嘌呤诱导的肾损伤模型中，肾组织中出现的腺嘌呤结晶沉积会引发病理性的炎症反应，进一步促进肾纤维化的发生。研究发现，Sulodexide能够显著改善肾损伤模型中的肾功能指标，并降低ECM的沉积，这表明其具有一定的抗纤维化作用。

Wnt/β-catenin信号通路在肾纤维化中的作用尤为关键。在正常成人肾脏中，该通路处于静默状态，但在肾损伤后会被激活。激活的Wnt信号通路不仅促进成纤维细胞的激活，还与EMT过程密切相关。EMT是肾纤维化中的一个重要事件，即肾小管上皮细胞转变为间质细胞，从而促进纤维化的发生。因此，探索能够调节Wnt信号通路的药物对于治疗肾纤维化具有重要意义。

Sulodexide作为一种糖胺聚糖，不仅具有抗炎和抗凝血的作用，还可能通过影响Wnt信号通路来减轻肾纤维化。研究发现，Sulodexide在肾损伤模型中能够显著降低α-SMA和FN的表达，同时抑制Wnt3a和β-catenin的表达。这些结果提示，Sulodexide可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来减少成纤维细胞的激活，从而减轻肾纤维化。此外，Sulodexide的治疗还表现出对肾组织结构的保护作用，这可能与其抗炎和抗凝血的特性有关。

在临床研究中，Sulodexide已被证实可以改善糖尿病患者的蛋白尿，并恢复视网膜和舌下微血管中糖萼的基线大小。这些结果进一步支持了Sulodexide在肾损伤中的保护作用。此外，Sulodexide在肝纤维化中的作用也得到了验证，它可以抑制肝窦内皮细胞的EndoMT过程。EndoMT是肾纤维化中的一个重要事件，因此，Sulodexide可能通过影响这一过程来减轻肾纤维化。

综上所述，本研究发现Sulodexide在腺嘌呤诱导的肾损伤模型中能够显著改善肾功能指标，并降低ECM的沉积。其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关，从而减少成纤维细胞的激活，减轻肾纤维化。这些结果为Sulodexide在肾纤维化治疗中的应用提供了新的思路，并为进一步研究其分子机制奠定了基础。