新型猫白血病病毒诊断试剂的突破：在血液、血浆及血清中实现高精度快速抗原检测

《Virology Journal》：A novel and superior diagnostic test for feline leukemia virus: enhanced precision in rapid detecting viral antigen in blood, plasma and serum

为解决现有猫白血病病毒(FeLV)快速检测试剂的准确性差异问题，研究人员开发了Vet Expert FeLV Ag快速检测试剂，并与五种市售试剂（包括IDEXX SNAP）进行头对头比较。结果显示，Vet Expert与SNAP均实现100%灵敏度、特异性及准确度，达到金标准PCR同等性能。该研究为兽医临床提供了更可靠、便捷的POCT（床旁检测）工具，对FeLV防控具有重要意义。

　　

猫白血病病毒（Feline Leukemia Virus, FeLV）是影响全球猫科动物健康的重要病原体，属于逆转录病毒科。自1964年Jarrett等人首次报道以来，FeLV已被确证可引发免疫抑制、淋巴瘤及骨髓抑制等多种严重疾病，是导致家猫死亡的关键因素之一。FeLV感染后的临床结局多样，包括中止感染（abortive infection）、回归感染（regressive infection）、短暂性病毒血症（transient viremia）及持续性病毒血症（persistent viremia）等，其诊断与管理的复杂性对兽医临床构成了持续挑战。

尽管过去几十年通过广泛检测FeLV流行率有所下降，但准确、快速的诊断仍是控制病毒传播和改善感染猫预后的核心。目前，FeLV的诊断主要依赖于检测病毒抗原，尤其是病毒衣壳中大量存在的p27蛋白，该方法能有效识别出具有临床意义的病毒血症期。酶联免疫吸附试验（ELISA）虽灵敏度高，但耗时长、需专用设备，难以满足现场快速检测（Point-of-Care Testing, POCT）的需求。聚合酶链式反应（PCR）技术可直接检测病毒核酸，甚至能发现潜伏期和回归性感染，被视作诊断的“金标准”，但其对实验室条件、操作人员及时间的依赖限制了其在常规临床中的普及。

横向流动分析（Lateral Flow Assay, LFA）凭借其快速、简便、适于POCT等优点，已成为FeLV抗原检测的常用工具。然而，市售LFA试剂的灵敏度和特异性参差不齐，兽医实践中常报告其性能未达预期，这可能导致误诊——假阳性结果引发不必要的隔离甚至安乐死，假阴性结果则加剧病毒在多猫环境中的传播风险。因此，开发并验证一种高精度、高可靠性的快速检测试剂至关重要。

在此背景下，Pawel Pawelczak、Alicja Laska-Modzelewska等研究人员在《Virology Journal》上发表了其最新研究成果，介绍了一种新型POCT试剂——Vet Expert FeLV Ag快速检测试剂的开发与验证。该研究旨在评估该试剂在检测血液、血浆及血清中FeLV p27抗原方面的诊断性能，并将其与包括IDEXX SNAP FIV/FeLV Combo在内的五种市售快速检测试剂进行直接比较，以确认其是否能为FeLV的疾病控制策略提供可靠依据。

为开展此项研究，团队从波兰不同地区收集了54份已知FeLV状态的猫源样本（36份初筛阳性，18份初筛阴性）。所有样本均通过检测FeLV前病毒（provirus）的PCR方法进行状态验证，确保参考标准的可靠性。研究发现，初筛阳性的样本中有4份PCR检测为阴性，可能代表处于病毒血症活跃但前病毒尚未整合的早期或非典型感染阶段，因此将这4份样本排除后，最终50份PCR确认状态的样本（32份阳性，18份阴性）被用于后续的快速检测比较。研究中评估的六种快速检测试剂包括：IDEXX SNAP FIV/FeLV Combo（一种横向流动ELISA试剂盒）、Fassisi FeLV、FASTest? FeLV、ToolVet FeLV test、Anigen Rapid FeLV Ag以及Vet Expert FeLV Ag。所有检测均严格按制造商说明进行，由两名操作者独立判读结果以控制操作者间变异。诊断性能指标（灵敏度、特异性、阳性预测值-PPV、阴性预测值-NPV、准确度-ACC）均以PCR结果为金标准进行计算。

研究结果显示，Vet Expert FeLV Ag试剂与IDEXX SNAP试剂在所有评估参数上均表现出色，达到了100%的灵敏度、特异性、PPV、NPV和整体准确度。这意味着在该研究样本集中，这两种试剂能够无误地识别所有FeLV感染和非感染的猫。其他试剂中，FASTest? FeLV表现出97%的灵敏度和100%的特异性，但NPV略降至94%；ToolVet test灵敏度为100%，特异性为81%；Anigen Rapid test的灵敏度和特异性分别为97%和88%。值得注意的是，Fassisi FeLV试剂的特异性最低，仅为41%，PPV也仅为68%，表明其产生假阳性结果的风险较高。

在讨论中，作者强调了诊断准确性对猫福利和疾病控制的重要性。假阳性结果可能导致不必要的临床决策，而假阴性结果则可能促进病毒传播。Vet Expert试剂与SNAP试剂均实现了完美的特异性，这意味着在临床实践中，其阳性结果具有极高的可信度。此外，作者还指出了Vet Expert试剂在实用性上的优势：与需要冷藏储存和使用前需平衡至室温约1小时的SNAP试剂不同，Vet Expert试剂可在室温储存，开袋即用，且仅需10-20微升样本量，这在时间紧迫或样本量有限的情况下更具优势。

综上所述，这项研究证实，新型Vet Expert FeLV Ag快速检测试剂在诊断FeLV感染方面具有与权威SNAP试剂相媲美的高可靠性和准确性。其优异的诊断性能，结合室温储存、即开即用等实用特点，使其成为兽医临床和现场检测中一个极具价值的工具。虽然本研究样本量有限，未来在更广泛 field conditions 下的应用仍需进一步验证，但现有数据强有力地支持了Vet Expert试剂在FeLV精准诊断中的重要地位。

主要技术方法概述

本研究采用PCR检测FeLV前病毒作为金标准，对50份经PCR验证的猫血样（32份FeLV阳性，18份阴性）进行检测。使用六种商业化FeLV抗原快速检测试剂（包括Vet Expert、IDEXX SNAP等）进行头对头比较，严格遵循各试剂操作说明。由两名操作者独立判读结果，计算各试剂的灵敏度、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)和准确度(ACC)等诊断性能指标。

研究结果

样本队列与PCR验证

初始收集的54份样本经PCR验证后，4份初筛阳性样本显示为前病毒阴性，最终50份（32阳，18阴）PCR确认样本用于快速检测性能评估，确保了评价基础的可靠性。

横向流动分析(LFAs)的诊断性能

六种试剂性能差异显著。Vet Expert和SNAP均实现100%的PPV、NPV、灵敏度、特异性和准确度。FASTest特异性100%，灵敏度97%。ToolVet灵敏度100%，特异性81%。Anigen Rapid灵敏度和特异性分别为97%和88%。Fassisi特异性最低(41%)，PPV仅68%，假阳性风险高。

讨论与结论

本研究通过头对头比较，证实新型Vet Expert FeLV Ag快速检测试剂在检测FeLV p27抗原方面具有卓越的诊断性能，其灵敏度、特异性、PPV、NPV和准确度均达到100%，与业界公认的SNAP试剂表现完全一致，显著优于其他部分市售试剂。高特异性对于避免假阳性导致的临床误判（如不必要的隔离）至关重要。此外，Vet Expert试剂具备室温储存、样本需求量少、即开即用等实用优势，使其更适用于临床POCT场景。尽管样本量可能限制对更广泛群体变异性的捕捉，但本研究为Vet Expert试剂在FeLV精准诊断和防控中的可靠应用提供了有力证据。