印度眼镜蛇（Naja naja）的毒液诱导中性粒细胞胞外陷阱（NET）形成：细胞毒素和钙离子流动的作用

《British Journal of Pharmacology》：Indian cobra (Naja naja) venom-induced neutrophil extracellular trap (NET) formation: The role of cytotoxins and calcium flux

中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的形成与眼镜王蛇（Naja naja）毒液相关，研究通过分子筛分发现第三分馏物（CTXF）及其纯化形式Np-CTX是主要诱导剂，揭示其通过钙信号和肌动蛋白动态变化机制激活NETs形成。

　　

摘要

背景与目的

中性粒细胞胞外陷阱（NETs）在由Echis carinatus和Naja naja毒液引起的局部和全身性病理反应中起着关键作用。本研究旨在确定导致N. naja毒液诱导NET形成的毒素。

实验方法

对N. naja毒液进行了分子筛分，以识别导致NET形成的毒素。将毒液分离后，发现第三组分（细胞毒素组分CTXF）能够诱导NET的形成。通过多种体内和体外实验来了解其作用机制，包括组织化学和免疫组织化学研究。为了得出恰当的结论，将CTXF与纯化的心脏毒素（Np-CTX）、神经毒素（Nn-NTX）和磷脂酶A₂（VRV-PL-XII）进行了比较分析。

主要结果

CTXF是一种非酶性质的细胞毒素。肽分析显示，CTXF是由四种分子量在6668至6778 Da之间的细胞毒素/心脏毒素组成的混合物，它们属于3FTx家族。体内实验表明，CTXF会严重损伤心肌，且CTXF和H3Cit特异性地定位于心肌组织中。CTXF和Np-CTX能够诱导NET的形成，而Nn-NTX和VRV-PL-XII则不能。NET的形成与通过储存操作型Ca²⁺内流机制导致的细胞内Ca²⁺浓度升高有关，同时伴随着肌动蛋白动态的变化。

结论与意义

本研究确定N. naja毒液中的3FTx家族细胞毒素/心脏毒素是NET形成的关键诱导因子。NET的形成机制涉及细胞质Ca²⁺浓度的短暂升高，从而导致细胞骨架的重排，这为缓解毒液引起的病理反应提供了潜在的治疗靶点。

图形摘要

CTXF/Np-CTX诱导的储存操作型钙内流（SOCE）机制。 CTXF/Np-CTX通过脂质依赖性寡聚化插入细胞膜，从而允许细胞外Ca²⁺被动进入细胞。这种Ca²⁺的内流会刺激内质网，激活Ryanodine受体1–3（RyRs1–3），使其从内部储存库释放Ca²⁺，导致Ca²⁺耗竭。这一过程会触发基质相互作用分子1–2（STIM1–2）的激活，这些分子进一步结合并激活细胞膜上的Ca²⁺通道Orai1–3，促使更多的Ca²⁺从细胞外环境中进入细胞，从而增加细胞质内的Ca²⁺浓度，最终引发CTXF/Np-CTX诱导的NET形成。

利益冲突声明

作者声明不存在任何利益冲突。

数据可用性声明

数据包含在文章和补充材料中。