通过GC-MS/MS方法检测并定量人头发和尿液中的氟西汀及其代谢物去甲氟西汀

《Toxicologie Analytique et Clinique》：Detection and quantification of fluoxetine and its metabolite norfluoxetine in human hair and urine by GC-MS/MS

建立氟西汀和诺氟西汀在人类头发和尿液中的GC-MS/MS检测方法，比较五种衍生化试剂效果，发现HFBA在70℃反应45分钟时检测效果最佳，头发中氟西汀和诺氟西汀检出浓度分别为40.9ng/mg和4.94ng/mg，尿液分别为10.8ng/mL和7.57ng/mL。

　　近年来，随着人们对健康和身材的关注不断上升，减肥产品在市场上占据了一定的份额。由于其具有一定的抗抑郁作用，氟西汀（Fluoxetine）被广泛用于临床治疗，而其减肥效果也引起了某些不法分子的注意。他们将氟西汀非法添加到减肥产品中，以期达到快速瘦身的目的。这种行为不仅违反了相关法律法规，还可能对消费者的健康造成严重威胁。因此，建立一种有效的检测方法以识别这些非法添加物变得尤为重要。

本研究旨在开发并优化一种基于气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）技术的化学衍生化方法，用于检测氟西汀及其活性代谢物去甲氟西汀（Norfluoxetine）在人体毛发和尿液中的含量。该方法不仅能够提高检测的灵敏度和特异性，还能为法医毒理学研究提供可靠的数据支持。研究还对五种常用的衍生化试剂在不同条件下的化学修饰效果进行了比较，以确定最适合用于分析的目标化合物。

氟西汀是一种选择性血清素再摄取抑制剂（SSRI），其主要作用是通过抑制神经元对血清素的再摄取，增强其在突触间隙中的浓度，从而改善情绪和抑制食欲。这一特性使其成为治疗抑郁症、强迫症、创伤后应激障碍和暴食症的重要药物。此外，氟西汀在儿童抑郁症和强迫症的治疗中也显示出良好的效果。然而，其副作用也不容忽视，包括胃肠道不适、神经系统反应以及较为罕见但严重的副作用，如性功能障碍、躁狂、代谢紊乱等。因此，氟西汀的使用必须严格遵循剂量指导，并且在某些情况下，过量使用可能导致严重的健康问题甚至死亡。

由于氟西汀具有较长的半衰期，其在人体内的代谢过程较为缓慢，这使得它在毛发和尿液中的残留时间相对较长。因此，通过毛发和尿液检测氟西汀及其代谢物，不仅能够提供更长时间范围内的暴露信息，还能在法医学和毒理学研究中发挥重要作用。为了确保检测的准确性，研究采用了多种样本处理和衍生化方法，并对这些方法进行了系统评估。

在样本处理过程中，毛发样本首先被清洗并剪切成约2毫米的长度，然后取50毫克的毛发样本加入内标物并进行水解处理。水解使用了1%的氢氧化钠溶液，以去除可能干扰检测的物质。随后，加入3毫升的乙酸乙酯，通过涡旋混合和离心处理，使目标化合物与干扰物质分离。尿液样本则被取为1毫升，并按照相同的处理步骤加入内标物和乙酸乙酯，再进行涡旋和离心处理。处理后的上清液在氮气流下蒸发至干燥，随后加入25微升的乙酸乙酯和25微升的HFBA（六氟丙酰胺），并在70摄氏度下加热45分钟，完成衍生化反应。最终，通过GC-MS/MS进行分析。

研究还对其他几种常用的衍生化试剂，如TFAA（三氟乙酸酐）、FPPA（五氟丙酸酐）、MSTFA（甲基硅烷三甲基氯硅烷）以及99% BSTFA（N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺）+ 1% TMCS（三甲基氯硅烷）进行了比较。结果显示，HFBA在70摄氏度下加热45分钟的条件下，对氟西汀和去甲氟西汀的化学修饰效果最佳，能够显著提高检测的灵敏度和特异性。相比之下，其他试剂在相同的条件下未能达到同样的效果，因此在实际检测中，HFBA被推荐为首选的衍生化试剂。

在实际应用中，氟西汀和去甲氟西汀在毛发和尿液中的浓度分别为40.9纳克/毫克和10.8纳克/毫升，而去甲氟西汀的浓度为4.94纳克/毫克和7.57纳克/毫升。这些数据表明，氟西汀在毛发中的残留量高于尿液，这可能与其较长的半衰期以及在毛发中较慢的代谢速度有关。此外，研究还对方法的准确性和精密度进行了评估，结果显示该方法具有良好的重复性和稳定性，适用于实际案例的检测。

本研究的方法不仅适用于法医毒理学领域，还能为临床医学和药物滥用监测提供重要参考。通过毛发和尿液的检测，可以更全面地了解个体在不同时间点的药物暴露情况，从而为药物滥用行为的识别和干预提供科学依据。此外，研究还强调了衍生化试剂在分析过程中的关键作用，指出选择合适的试剂能够显著提高检测的准确性和可靠性。

在方法验证过程中，研究遵循了国际标准，对选择性、检测限（LOD）、定量限（LOQ）、线性、准确度、精密度、提取回收率以及稳定性等指标进行了评估。实验中使用了10名志愿者提供的空白尿液和毛发样本，并按照相同的处理流程加入内标物。通过这些空白样本，研究能够确保检测方法的基线稳定性和准确性。同时，研究还对不同浓度的校准样品进行了重复分析，以验证方法的重复性和一致性。

实验结果表明，该方法在检测氟西汀和去甲氟西汀方面具有良好的选择性，能够有效区分内源性物质和外源性物质。在毛发和尿液中，氟西汀-HFBA和去甲氟西汀-HFBA的质谱图显示几乎与参考标准一致，说明该方法在实际应用中具有较高的分析特异性。此外，研究还对实际案例进行了分析，进一步验证了该方法的实用性。

总体而言，本研究为检测氟西汀及其代谢物在人体毛发和尿液中的含量提供了一种新的方法，并对不同衍生化试剂的使用效果进行了系统比较。这一成果不仅有助于法医毒理学研究，还能够为药物滥用监测和减肥产品安全性评估提供重要的技术支持。同时，研究也提醒人们，对于氟西汀这类药物，必须严格遵守剂量规范，避免因过量使用而引发的健康风险。