揭示甲状腺癌内T细胞抗原特异性：突破免疫治疗耐药瓶颈的关键一步

《The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism》：Tumor-infiltrating T Lymphocytes Recognize Thyroid-specific and Neo-antigens in Follicular Cell-derived Thyroid Cancers

为破解甲状腺癌对免疫检查点抑制剂（ICI）单药原发耐药的难题，研究团队首次系统分离并体外扩增肿瘤浸润T细胞（TIL），证实其可识别甲状腺特异性抗原（TPO、Tg）及BRAFV600E等新生抗原（neoantigen），在13例患者中检出反应率分别达84.6%、69.2%与80%。结果直接提示低突变负荷并非免疫沉默主因，为TIL过继疗法与mRNA多抗原疫苗联合ICI的临床转化奠定理论基础。

　　

研究背景
甲状腺癌是全球增长最快的内分泌恶性肿瘤，其中分化型（DTC）与未分化型（ATC）对免疫检查点抑制剂（ICI）反应率仅9%–30%，远低于黑色素瘤等“热肿瘤”。传统观点认为其突变负荷低、缺乏足够新生抗原，导致T细胞“无的放矢”。然而临床观察到肿瘤组织内却常见大量T细胞浸润，形成“免疫荒漠”与“免疫热土”并存的悖论。究竟是T细胞功能耗竭？抗原呈递缺陷？还是根本找错靶点？这些疑问成为制约免疫治疗突破的“卡脖子”问题。

为回答上述疑问，美国科罗拉多大学Anschutz医学校区Jena D. French团队联合癌症中心、病理科与生物信息学部，开展了一项“从手术台到培养皿”的系统性研究：直接取患者原发灶与转移淋巴结，体外扩增TIL，结合高通量测序与HLA结合预测，全面扫描甲状腺特异性蛋白、驱动突变及基因融合产生的新生抗原，再反向验证T细胞能否“认得出、打得动”。论文2025年发表于《The Journal of Clinical Endocrinology》。

关键技术方法
研究纳入13例手术患者，建立原发灶+肿瘤浸润淋巴结（TILN）配对队列；利用RNA-seq、靶向测序与融合检测筛选突变与融合；以NetMHCpan 4.1/NetMHCIIpan 4.0预测HLA-I/II类结合；免疫磁珠联合IL-2/IL-21体外14天扩增TIL；CFSE-CD137^{流式与IFN-γ ELISA双终点检测抗原特异性；TCRβ深度测序评估克隆扩增与共享程度。}

研究结果
TIL扩增与克隆分布
所有样本均成功扩增出CD4^{与CD8 TIL，产量3.8×10–1×10；TCRβ测序显示T3/T4期肿瘤Simpson克隆性指数显著高于T1/T2（p=0.0101），且6/8例患者原发灶与TILN存在共享优势克隆，提示肿瘤驱动抗原持续招募T细胞。}

新生抗原预测
5例携带BRAFV600E，算法预测所有患者至少出现1条HLA-I弱结合肽段；CCDC6-RET融合在1例患者预测到43条HLA-II结合肽（10条强结合）。

甲状腺特异性抗原表达
RNA-seq显示Tg、TPO在DTC中高表达，ATC几乎缺失；TCGA联合GTEX数据库验证Tg、TPO、TSHR在甲状腺组织显著富集，为“自身抗原”提供表达依据。

T细胞功能验证
体外mDC呈递实验显示：

• TPO反应性 11/13例（84.6%）
• Tg反应性 9/13例（69.2%）
• 肿瘤裂解液反应性 12/13例（92.3%）
• BRAFV600E肽段反应性 4/5例（80%）
• TPR-NTRK1、CCDC6-RET融合肽各在对应患者触发CD137^{上调与IFN-γ分泌。
  值得注意的是，5例合并慢性淋巴细胞性甲状腺炎（CLT）患者TIL对TPO、Tg双阳性率达100%，提示自身免疫背景可放大抗肿瘤T细胞交叉反应。}

免疫微环境
免疫组化证实11/12例标本存在CD8^{浸润，但6/20例HLA-I表达缺失或极低；CD163免疫抑制性巨噬细胞在19/20例广泛分布，提示抗原呈递障碍与免疫抑制共同构成ICI耐药“双保险”。}

研究结论与讨论
本研究首次直接证实：即便突变负荷低，甲状腺癌仍可通过甲状腺特异性蛋白与驱动突变产生足够抗原，激活并维持肿瘤内T细胞克隆扩增；低ICI疗效更多归因于HLA-I下调与免疫抑制微环境，而非“无抗原”或“T细胞缺席”。因此，未来策略应：

1. 对可手术患者施行TIL过继细胞治疗，绕过抗原呈递缺陷；
2. 设计包含TPO、Tg、BRAFV600E及个体融合表位的mRNA多抗原疫苗，联合ICI重塑抗原呈递；
3. 辅以巨噬细胞靶向药物清除CD163^{抑制网络，释放T细胞功能。}

该发现不仅改写“低突变负荷=免疫冷肿瘤”的传统认知，也为难治性甲状腺癌提供了可立即转化的精准免疫治疗路线图。