《European Journal of Pharmacology》：Oxymatrine regulates microglia to produce IFN-β by activating the STING/TBK1/IRF3 pathway against experimental autoimmune encephalomyelitis
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氧化马钱子碱通过激活STING/TBK1/IRF3通路促进小胶质细胞产生IFN-β，改善EAE小鼠神经功能并抑制炎症反应，C176可逆转该效应。该机制为多发性硬化症治疗提供新思路，但需临床验证。
王双双|金鑫|马文迪|李文英|窦梦梦|严通音|刘楠|刘冲|赵晓宇|张明良|朱琳|褚瑶娟
郑州大学第一附属医院药学系，中国郑州建设东路1号，450052
摘要
氧马汀是一种具有免疫调节作用的生物碱。近期研究表明，氧马汀通过促进干扰素-β（IFN-β）的产生，能够抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE），这是一种多发性硬化症（MS）的动物模型。然而，氧马汀调节IFN-β产生的具体机制尚不清楚。本研究旨在通过体内和体外实验，探讨氧马汀在治疗EAE中的药理作用及相关分子机制。氧马汀能够缓解EAE小鼠的神经功能障碍、脱髓鞘和炎症反应，减少小胶质细胞/巨噬细胞的浸润和极化，降低促炎细胞因子（iNOS、TNF-α）的水平，并增强IL-10和IL-27的表达。此外，氧马汀还能上调EAE小鼠中的STING/TBK1/IRF3信号通路，从而促进小胶质细胞产生IFN-β。同样，在LPS诱导的BV2细胞中，氧马汀也能抑制炎症因子并激活STING/TBK1/IRF3通路，增强IFN-β的产生。值得注意的是，使用STING抑制剂C176处理后，EAE小鼠和LPS诱导的BV2细胞中的这些效应均被逆转，证实了该通路在氧马汀治疗机制中的关键作用。氧马汀通过上调STING/TBK1/IRF3信号通路来促进小胶质细胞产生IFN-β，从而缓解EAE的神经功能障碍并减少病理和炎症反应。本研究发现了氧马汀的一种新的抗EAE机制：通过激活STING/TBK1/IRF3通路来促进小胶质细胞产生IFN-β。然而，这一机制仍需临床样本验证。如果得到证实，氧马汀可能为MS患者提供一种更经济、更方便的内源性IFN-β诱导方案。
引言
多发性硬化症（MS）是一种慢性自身免疫性、炎症性和神经退行性疾病，影响中枢神经系统（CNS）。其特征是免疫失调，导致免疫细胞侵入CNS，引发脱髓鞘、轴突损伤和神经退行性变（Jakimovski等，2024）。小胶质细胞是维持CNS稳态的先天免疫细胞，在MS的发病机制中起重要作用（Cao和He，2013；Nan等，2024）。它们产生免疫调节细胞因子干扰素-β（IFN-β）、IL-10、IL-13和TGF-β（Chu等，2018；Jansen等，2022；West等，2019），这些细胞因子可以抑制CNS的炎症。目前，MS仍然难以治愈，没有任何药物能够完全阻止或逆转神经系统的进行性退行性病变（Gregson等，2019）。根据最新的多发性硬化症地图数据，全球有280万人患有MS（Jakimovski等，2024）。由于缺乏特异性治疗方法，该疾病给患者、家庭、医疗系统和社会带来了巨大负担（Jakimovski等，2024）。因此，迫切需要开发更有效的治疗策略。
IFN-β是一种天然存在的蛋白质，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用，能够调节免疫系统并抑制促炎细胞因子的产生（Raftopoulou等，2022），是目前MS最常用的治疗方法之一。干扰素基因刺激因子（STING）是一种关键的先天免疫分子。它不仅能识别环状二核苷酸以诱导IFN-β的表达（Cai等，2014），还作为双链DNA受体的适配器。激活后，STING会转位并激活TBK1/IRF3级联反应，促进IFN-β的产生（Ran等，2014），使STING/IFN-β通路激活成为治疗MS/EAE的潜在策略。
马汀是从Sophora flavescens根部提取的喹诺利啶生物碱成分（Gong等，2016）。其主要成分是氧马汀（Oxy）（Miao W等，2024；Wang等，2020）。与马汀相比，Oxy的生物利用度更高。先前的研究表明，氧马汀可以缓解EAE的临床症状，减少炎症浸润，并减轻CNS的脱髓鞘（Chu等，2021）。此外，它还被发现可以在外周和中枢神经系统诱导IFN-β、IL-10和IL-27的产生（Chu等，2020）。然而，这种诱导的机制尚不清楚。具体来说，目前尚不清楚氧马汀是否通过调节STING通路来诱导小胶质细胞产生内源性IFN-β——这是本研究要解决的关键问题。因此，本研究的目的是探讨这一重要问题。
药物和试剂
热灭活的结核分枝杆菌粉末（编号231141，BD，美国批次），弗氏不完全佐剂（Sigma，美国密苏里州圣路易斯），MOG35-55肽粉末（Kingsley Biotechnology Co.，中国南京），百日咳毒素（Sigma-Aldrich，丹麦布隆德比），BCA蛋白浓度测定试剂盒（Servicebio，中国武汉），转录试剂盒（TaKaRa，日本），C176（HY–112906 MCE），氧马汀（Yuanye Bio-Technology，上海），玉米油（HY - Y1888 MCE），LPS（Sigma-Aldrich），HE染色试剂盒（Servicebio）
氧马汀减轻了EAE小鼠的临床严重程度
EAE的特点是脱髓鞘、髓鞘丢失和免疫细胞的募集（McGinley等，2021）。为了评估氧马汀和C176对EAE的治疗效果，我们评估了EAE小鼠的神经功能症状、炎症细胞浸润和脱髓鞘情况。PBS处理的免疫小鼠在第13天开始出现EAE的初始症状。氧马汀处理组的平均临床评分显著低于PBS处理组（P<0.001）（图1A）
讨论
本研究显示，氧马汀通过抑制小胶质细胞的浸润和活化，减少促炎细胞因子的表达，并促进免疫调节因子的产生，从而缓解了EAE引起的神经功能障碍和脱髓鞘。值得注意的是，STING抑制剂C176部分逆转了氧马汀的效应，表明其治疗机制主要是通过激活小胶质细胞中的STING/TBK1/IRF3信号通路来诱导IFN-β的产生。据我们所知，
结论
研究表明，氧马汀通过抑制小胶质细胞的活化、减少促炎细胞因子的表达并促进免疫调节因子，从而缓解了神经功能障碍和脱髓鞘。值得注意的是，STING抑制剂C176部分逆转了这些效应，表明氧马汀的治疗效果涉及激活小胶质细胞中的STING/TBK1/IRF3通路以诱导IFN-β的产生。这为氧马汀在MS治疗中的临床应用提供了科学依据。然而，
作者贡献声明
赵晓宇：正式数据分析。刘冲：撰写 – 审稿与编辑。朱琳：资金获取。张明良：方法学。金鑫：方法学、研究、正式数据分析、数据管理。褚瑶娟：项目管理、资金获取。王双双：撰写 – 原稿撰写、可视化、方法学、研究、正式数据分析、概念构思。李文英：数据管理。马文迪：撰写 – 审稿与编辑。严通音：可视化。窦梦梦：
利益冲突声明
? 作者声明没有已知的利益冲突或个人关系可能影响本文的研究结果。
致谢
本研究得到了河南省重点研究与推广项目（编号252102310506）和河南省医学科技研究计划（编号LHGJ20240262）的支持。
